[發(fā)明專利]一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測方法

在審

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• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110734922A
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發(fā)明（設計）人: 劉守安;何勝男;魏毅;張世宏
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 22201 長春吉大專利代理有限責任公司
• 代理人: 姜姍姍

本發(fā)明涉及一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測方法，將提取茶樹葉片基因組DNA，分別用特異性引物CcGAPDH?F/CcGAPDH?R和Cs18SrDNA1?F/Cs18SrDNA1?R通過熒光定量PCR的方法擴增基因組DNA，得到擴增Ct值，計算2^?ΔCt值，獲得2^?ΔCt(CcGAPDH)和2^?ΔCt(Cs18SrDNA1)的比值，根據比值的大小，可以比較該病原菌發(fā)病的程度。本發(fā)明可以檢測和監(jiān)控產茶區(qū)Colletotrichum camelliae的發(fā)生、擴展和流行，并廣泛用于茶樹品種的抗性篩選，以及判定不同病原菌的致病性差異，尤其是其采用病原菌的序列跟寄主植物的序列比對，更能隨著時間的變化監(jiān)控病原菌的發(fā)展。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學領域，具體涉及一種茶樹炭疽病菌Colletotrichumcamelliae的檢測方法，應用在茶樹炭疽病的早期診斷、病菌的監(jiān)測和鑒定中，尤其適用于茶樹抗性品種的鑒定和病原菌致病力的評價。

背景技術

茶是由茶樹(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)的新芽制作得到。迄今，國際上記載的導致茶葉減產的茶樹病害有300多種，危害部位包含茶樹的葉片、根部、茶花以及果實等。由于茶樹的收獲部位是新稍，因此，茶樹葉部病害的危害性比其他作物的葉病更大。

在我國有記載的茶樹病害約100種以上，近年來，由于大幅度改善肥水條件和大面積推廣無性系良種，病害更加呈上升趨勢，茶樹炭疽病是茶樹的主要葉部病害之一。茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae是引起茶樹炭疽病的優(yōu)勢病原菌之一，廣泛分布于我國各大產茶區(qū)。

目前，關于茶樹品種抗病性以及病原菌致病性的分析依賴于利用葉片感染部位的損傷大小來量化病原菌的生長。上述方法的缺點是不能敏銳的檢測致病過程中的微小變化，也不能準確定量感染早期病原體的生長。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供一種編碼茶樹炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，長度為82bp，命名為CcGAPDH。將此核苷酸序列在國際基因庫中進行檢索，發(fā)現屬于3-磷酸甘油醛脫氫酶。本發(fā)明提供一種擴增上述的編碼茶樹炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因的特異性引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQID NO.3所示，命名為CcGAPDH-F、CcGAPDH-R。本發(fā)明提供一種從茶樹Camellia sinensis基因組中克隆得到的18SrDNA序列，命名為Cs18SrDNA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，序列長度為167bp。本發(fā)明提供一種擴增上述的從茶樹Camellia sinensis基因組中克隆得到的18SrDNA序列的特異性引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，分別命名為Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R。

本發(fā)明提供一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測方法，具體步驟如下：

步驟一、提取茶樹葉片的基因組DNA，所述的茶樹葉片包含發(fā)病葉片和不發(fā)病葉片；

步驟二、用所述的引物CcGAPDH-F、CcGAPDH-R通過熒光定量PCR的方法擴增步驟一中得到的基因組DNA，得到Ct值，計算2^-ΔCt值；

步驟三、用所述的引物Cs18SrDNA1-F、Cs18SrDNA1-R通過熒光定量PCR的方法擴增步驟一中得到的基因組DNA，得到Ct值，計算2^-ΔCt值；