[發明專利]一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測方法

在審

• 申請號: 201911040862.6
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110734922A
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發明（設計）人: 劉守安;何勝男;魏毅;張世宏
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 22201 長春吉大專利代理有限責任公司
• 代理人: 姜姍姍

1.一種編碼茶樹炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，長度為82bp，命名為CcGAPDH。

2.一種擴增如權利要求1所述的編碼茶樹炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因的特異性引物，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示，命名為CcGAPDH-F、CcGAPDH-R。

3.一種從茶樹Camellia sinensis基因組中克隆得到的18SrDNA序列，命名為Cs18SrDNA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，序列長度為167bp。

4.一種擴增如權利要求3所述的從茶樹Camellia sinensis基因組中克隆得到的18SrDNA序列的特異性引物，其特征在于：如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，分別命名為Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R。

5.一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟一、提取茶樹葉片的基因組DNA，所述的茶樹葉片包含發病葉片和不發病葉片；

步驟二、用所述的引物CcGAPDH-F、CcGAPDH-R通過熒光定量PCR的方法擴增步驟一中得到的基因組DNA，得到Ct值，計算2^-ΔCt值；

步驟三、用所述的引物Cs18SrDNA1-F、Cs18SrDNA1-R通過熒光定量PCR的方法擴增步驟一中得到的基因組DNA，得到Ct值，計算2^-ΔCt值；

步驟四、步驟二中得到的2^-ΔCt(CcGAPDH)值為分子，步驟三中得到的2^-ΔCt(Cs18SrDNA1)的值為分母，若比值為0，則未檢測到該病原菌；若比值大于0，則表明茶樹已感染該病原菌；根據比值的大小，比較該病原菌致病的程度以及茶樹品種抗病的差異。

6.一種茶樹炭疽病菌Colletotrichum camelliae的檢測試劑盒，其具體組成成分如下：試劑盒1的組成成分包括：所述的引物CcGAPDH-F和CcGAPDH-R和定量PCR反應混合液；試劑盒2的組成成分包括：所述的引物Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R和定量PCR反應混合液。