[發(fā)明專利]用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR引物、試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911039964.6
• 申請(qǐng)日: 2019-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN110904250B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏廣亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 知幾未來(lái)（成都）臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01;C12R1/225;C12R1/23;C12R1/25
• 代理公司: 北京華清迪源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

1.一種用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR引物和探針，其特征在于包括針對(duì)長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和阿克曼氏菌的16SrDNA設(shè)計(jì)引物對(duì)及探針，其中，所述長(zhǎng)雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌和短雙歧桿菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示；

所述長(zhǎng)雙歧桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:3所示，所述動(dòng)物雙歧桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:4所示，所述短雙歧桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:5所示；

所述鼠李糖乳桿菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6和SEQ?ID?NO:7所示，所述鼠李糖乳桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:8所示；

所述羅伊氏乳桿菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9和SEQ?ID?NO:10所示，所述羅伊氏乳桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:11所示；

所述阿克曼氏菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12和SEQ?ID?NO:13所示，所述阿克曼氏菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:14所示；

所述嗜酸乳桿菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:15和SEQ?ID?NO:16所示，所述嗜酸乳桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:17所示；

所述植物乳桿菌的引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:18和SEQ?ID?NO:19所示，所述植物乳桿菌核苷酸探針序列如SEQ?ID?NO:20所示。

2.一種用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述PCR檢測(cè)試劑包括權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR引物和探針。

3.如權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，其特征在于還包括含有Mg?2+的PCR反應(yīng)緩沖液、dNTP、以及PCR擴(kuò)增酶。

4.如權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述檢測(cè)試劑盒用于同時(shí)檢測(cè)長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和阿克曼氏菌。

5.如權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述PCR引物和探針?lè)殖傻谝唤M分、第二組分以及第三組分；其中，所述第一組分包括所述長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌和動(dòng)物雙歧桿菌的引物和探針；

所述第二組分包括所述鼠李糖乳桿菌和羅伊氏乳桿菌的引物和探針；

所述第三組分包括阿克曼氏菌、嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌的引物和探針。

6.一種在非診斷或治療中檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR的方法，其特征在于，包括利用長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌和阿克曼氏菌的16SrDNA作為模板，以及權(quán)利要求1所述的PCR引物和探針進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR的過(guò)程。

7.如權(quán)利要求6所述的在非診斷或治療中檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR的方法，其特征在于，所述PCR引物和探針?lè)殖傻谝唤M分、第二組分以及第三組分；其中，所述第一組分包括所述長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌和動(dòng)物雙歧桿菌的引物和探針；

所述第二組分包括所述鼠李糖乳桿菌和羅伊氏乳桿菌的引物和探針；

所述第三組分包括阿克曼氏菌、嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌的引物和探針。

8.如權(quán)利要求6所述的在非診斷或治療中檢測(cè)多種菌的多重?zé)晒舛縋CR的方法，其特征在于，所述多重?zé)晒舛縋CR反應(yīng)過(guò)程包括去污染50℃3min，1cycle，預(yù)變性95℃，15min，變性95℃20s，35cycle，退火60℃40s，延伸60℃40s。