[發明專利]黑曲霉YH-6及其應用于提高淫羊藿中淫羊藿素的含量

有效

• 申請號: 201911038280.4
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110699263B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 梅建鳳;王萍萍;吳霞;應國清;易喻
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/06;C12N9/24;C12R1/685
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.黑曲霉(Aspergillus niger)YH-6，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC No:60793，保藏日期2019年9月27日，地址：廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓；郵編：510075。

2.一種利用權利要求1所述黑曲霉YH-6提高淫羊藿中淫羊藿素含量的應用，其特征在于所述應用為：將黑曲霉YH-6經發酵培養的發酵液過濾，取濾液，加入淫羊藿，在30–35℃、150–200r/min的振蕩條件下轉化24–36h，過濾除去粗酶液，濾餅烘干，即得富含淫羊藿素的淫羊藿。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述淫羊藿的加入量以濾液體積計為20–50g/L。

4.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述淫羊藿在加入前需在85℃干燥并粉碎過80目篩。

5.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述濾液制備方法為：將黑曲霉YH-6接種于產酶培養基中，于28–30℃、200–250r/min恒溫振蕩條件下培養2–3d，發酵液過濾，濾液即為糖苷酶粗酶液；所述產酶培養基終濃度組成為：淫羊藿苷1–2g/L，蔗糖10–15g/L，酵母浸粉5–10g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.2g/L，溶劑為自來水，pH 6.0。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述產酶培養基組成為：淫羊藿苷2g/L，蔗糖15g/L，酵母浸粉10g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.2g/L，溶劑為自來水，pH為6.0。

7.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述濾餅烘干條件為85℃、5–8h。

8.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述黑曲霉YH-6在發酵前，先經平板培養基活化培養制備孢子，或經過種子培養基擴大培養制備種子液，然后用孢子或種子液以體積濃度5％的量接入產酶培養基進行產酶培養，所述黑曲霉YH-6發酵培養方法為：

(1)活化培養：將黑曲霉YH-6接種于PDA平板培養基，于28–30℃恒溫培養2–3d，獲得黑曲霉YH-6孢子；所述的PDA平板培養基終濃度組成為：馬鈴薯200g/L，蔗糖20g/L，瓊脂20g/L，溶劑為自來水，pH自然；

(2)種子擴大培養：挑取步驟(1)活化培養后黑曲霉YH-6孢子接種至種子培養基中，于28–30℃、200–250r/min恒溫振蕩條件下培養1–2d，得種子液；所述種子培養基組成為：蔗糖10–15g/L，酵母浸粉5–10g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.2 g/L，溶劑為自來水，pH 6.0；

(3)產酶培養：用步驟(1)活化培養后黑曲霉YH-6孢子，或步驟(2)制備的種子液按體積濃度5％的接種量接入產酶培養基，于28–30℃、200–250r/min恒溫振蕩條件下培養2–3d，獲得發酵液；所述產酶培養基終濃度組成為：淫羊藿苷1–2g/L，蔗糖10–15g/L，酵母浸粉5–10g/L，KH₂PO₄ 2g/L，MgSO₄ 0.5g/L，CaCl₂ 0.2g/L，溶劑為自來水，pH 6.0。