[發(fā)明專利]黑曲霉YH-6及其應(yīng)用于提高淫羊藿中淫羊藿素的含量

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911038280.4
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110699263B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梅建鳳;王萍萍;吳霞;應(yīng)國清;易喻
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/06;C12N9/24;C12R1/685
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發(fā)明公開了一種黑曲霉YH?6及其應(yīng)用于提高淫羊藿中淫羊藿素的含量。淫羊藿中的淫羊藿素含量提高幅度大，最高可達26.3倍，含量由原來的0.273mg/g提高到7.44mg/g。相比于酸水解法，具有專一性好，產(chǎn)物得率高；相比于純酶法轉(zhuǎn)化，生物催化劑的成本低，且可使淫羊藿中多種糖苷轉(zhuǎn)化為淫羊藿素，其含量提高幅度大。本發(fā)明實現(xiàn)了淫羊藿中藥效成分原位轉(zhuǎn)化，經(jīng)處理的淫羊藿作為淫羊藿素提取的原料，提取產(chǎn)率大幅度提高。

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用生物轉(zhuǎn)化法提高淫羊藿中淫羊藿素含量的方法。

(二)背景技術(shù)

淫羊藿素(icaritin)，又稱脫水淫羊藿素(anhydroicaritin)、淫羊藿苷元，CAS號為118525-40-9，分子式為C₂₁H₂₀O₆，分子量為368.4，屬于黃酮類化合物。目前研究已表明，淫羊藿素有雌激素樣、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、促進心肌細胞再生和分化、促骨質(zhì)保護、促進神經(jīng)細胞分化、抗肝損傷及延緩肝纖維化、抗腫瘤、貧血治療及降低血糖等作用，而且未發(fā)現(xiàn)淫羊藿素對正常細胞有明顯的毒副作用，說明其具有較高的安全性。作為一種低毒和高效的藥物，淫羊藿素具有廣闊的應(yīng)用前景。

淫羊藿素天然存在于小檗科淫羊藿屬(Epimedium)植物中，如淫羊藿(Epimediumbrevicomu)、箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens)或朝鮮淫羊藿(Epimedium koreanum)等，但在這些植物中的含量很低，如在中藥材淫羊藿(Epimedii Folium)中含量僅為0.06–0.10mg/g；而它的糖苷，包括淫羊藿苷(icariine,CAS:489-32-7)、寶藿苷I(baohuoside I,CAS:113558-15-9)、箭藿苷A(sagittatoside A,CAS:118525-35-2)、箭藿苷B(sagittatoside B,CAS:118525-36-3)、朝藿定A(epimedinA)、朝藿定B(epimedin B,CAS:110623-73-9)和朝藿定C(epimedin C,CAS:110642-44-9)等的含量較高，如在淫羊藿中，淫羊藿苷的含量可以高達9.99mg/g，朝藿定C的含量達到7.52mg/g[黃彌娜,周燕妮,柳強,等.HPLC法測定不同產(chǎn)地淫羊藿中7種主要黃酮類成分的含量.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2015,36(12):1352–1355]。所以，淫羊藿素的生產(chǎn)方法一般是通過水解淫羊藿苷獲得。

目前，由淫羊藿苷為原料水解制備淫羊藿素的方法，已有一些研究報道和專利申請，都是以淫羊藿苷為原料，用酶解法、酸解法或酸酶結(jié)合法水解。酶解法采用蝸牛酶和柚苷酶，其優(yōu)點是轉(zhuǎn)化率高，但存在酶的成本高，酶解反應(yīng)時間長的缺點；酸解法具有成本低的優(yōu)勢，但水解過程容易產(chǎn)生次生苷，致使轉(zhuǎn)化率偏低，所以目前仍然缺乏經(jīng)濟有效的淫羊藿素生產(chǎn)方法。

如果采用微生物發(fā)酵的含糖苷酶的粗酶液處理淫羊藿，因含多種類型的糖苷酶，可以將淫羊藿苷及其他幾種苷，都轉(zhuǎn)化為淫羊藿素(化學(xué)反應(yīng)式見圖1)，其含量可大幅度提高，而且微生物產(chǎn)生的多糖水解酶對植物組織結(jié)構(gòu)的纖維素和半纖維素水解，使淫羊藿質(zhì)地疏松，從而有利于淫羊藿素的釋放。經(jīng)過轉(zhuǎn)化處理的淫羊藿作為淫羊藿素提取的原料，提取率將大幅度提高，從而降低其生產(chǎn)成本。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一株產(chǎn)糖苷酶的微生物新菌株—黑曲霉(Aspergillus niger)YH-6，及其在提高淫羊藿中淫羊藿素含量中的應(yīng)用。經(jīng)轉(zhuǎn)化處理的淫羊藿中，淫羊藿素的含量顯著提高，工藝具有成本低、流程簡單、轉(zhuǎn)化效率高等優(yōu)點。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一株新菌株—黑曲霉(Aspergillus niger)YH-6，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC No:60793，保藏日期2019年9月27日，地址：廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓；郵編：510075。