[發明專利]一種水稻粒重相關的OsGASR9基因及應用、蛋白質、表達載體和轉基因水稻的方法

在審

• 申請號: 201911038016.0
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110643617A
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發明（設計）人: 李相伯;周勇;朱韻;梁國華;繆軍;史雙月;陶亞軍;彭秀榮;李暢;楊澤峰
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/84;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 11569 北京高沃律師事務所
• 代理人: 呂紀濤

1.一種水稻粒重相關的OsGASR9基因，其特征在于，所述OsGASR9基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.權利要求1所述的OsGASR9基因在提高水稻粒重中的應用。

3.一種權利要求1所述的OsGASR9基因編碼的蛋白質，其特征在于，所述蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.一種表達載體，其特征在于，將權利要求1所述的OsGASR9基因插入到初始載體中，得到表達載體。

5.根據權利要求4所述的表達載體，其特征在于，所述初始載體包括pC1300Actin-3×Flag載體。

6.根據權利要求4或5所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體的構建方法包括以下步驟：

1)提取水稻葉片總mRNA，將所述總mRNA反轉錄為cDNA，以所述cDNA為模板用擴增引物對進行PCR擴增，得到擴增產物，將所述擴增產物與pLB-Simple載體連接、熱擊、轉化大腸桿菌，將得到的轉化物在含氨芐青霉素的培養基上培養，得到陽性克隆，提取得到質粒；

所述擴增引物對包括擴增上游引物和擴增下游引物，所述擴增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述擴增下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

2)將所述步驟1)得到的質粒經XmaI和XbaI雙酶切，得到OsGASR9基因；將pC1300Actin-3×Flag載體經Xma I和Xba I雙酶切，得到酶切載體；將所述OsGASR9基因和酶切載體經T4連接酶連接，得到表達載體。

7.根據權利要求6所述的表達載體，其特征在于，所述步驟1)PCR使用的體系每50μL包括：2×GC Buffer 25μL、10mM dNTP Mix 4μL、濃度為10μmol/L的擴增上游引物1μL、濃度為10μmol/L的擴增下游引物1μL、cDNA模板2μL、5U/μL的高保真Taq酶0.5μL和ddH₂O 16.5μL。

8.根據權利要求6或7所述的表達載體，其特征在于，所述PCR擴增的程序包括：95℃5min；95℃30s，53℃30s，72℃40s，30個循環；72℃10min。

9.根據權利要求6所述的表達載體，其特征在于，所述步驟2)連接的體系每10μL包括：OsGASR9基因6μL、酶切載體2μL、10х連接Buffer 1μL和T4連接酶1μL。

10.一種培育轉基因水稻的方法，其特征在于，將權利要求4～8任一項所述的表達載體轉化根癌農桿菌，將轉化后的根癌農桿菌轉化水稻，得到轉基因水稻。