[發明專利]動力學分析檢測水果蔬菜中農藥殘留的檢測方法

在審

• 申請號: 201911038009.0
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110927147A
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發明（設計）人: 高康復;高潔;王建山;駱穩寧;鄭智博
• 申請（專利權）人: 陜西金色科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 張舉

本發明涉及一種動力學分析檢測水果蔬菜中農藥殘留的檢測方法，目的是解決現有技術中存在的由于人工操作不同步而導致對結果誤判的問題。本發明是以酶抑制法為基本原理，利用乙酰膽堿酯酶與碘化乙酰硫代膽堿的反應產生硫代膽堿的速率為勻速反應，因此在動力學模式下通過比較對照溶液和樣品提取液中乙酰膽堿酯酶與碘化乙酰硫代膽堿的反應速率，計算酶抑制率，對國標方法進行優化，消除人工操作不同步帶來的誤差，從而快速、準確測定中水果蔬菜中農藥殘留。

技術領域

本發明涉及食品安全檢測技術領域，具體涉及一種動力學分析檢測水果蔬菜中農藥殘留的檢測方法。

背景技術

有機磷類和氨基甲酸酯類農藥在農作物病蟲害防治工作當中發揮著無可替代的作用，目前，對于水果蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥的檢測方法主要由氣相色譜法、液相色譜法、色譜質譜聯用法、分光光度法等，前面的三種方法是實驗室中最常采用的定量測定方法，但是由于所需的儀器設備昂貴，且對操作人員的技術水平要求高，對實驗的環境、場地等參數要求嚴格，所以難以滿足快速檢測的需求。

國標中規定了農藥殘留的快速檢測方法，該方法的原理是有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農藥的濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物(乙酰膽堿)水解，其水解產物與顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，每次實驗需同時測試空白組與樣品組，通過對比相同時間內對照溶液與測試溶液在3min內吸光度變化的比值，計算出抑制率。

由于對照溶液與測試溶液的吸光度從底物加入之后隨時間不斷變化，3min后吸光度仍在持續增加，如果對照溶液與測試溶液的吸光度判讀不同步，會導致結果出現偏差，另外前后兩次實驗操作起止時間的判讀不一致，則會出現多次測量結果精密度差，尤其對于抑制率在50％附近的樣品，可能會導致結果的誤判。

發明內容

本發明的目的是解決現有技術中存在的由于人工操作不同步而導致對結果誤判的問題，而提供了一種動力學分析檢測水果蔬菜中農藥殘留的檢測方法。

本發明是以酶抑制法為基本原理，利用乙酰膽堿酯酶與碘化乙酰硫代膽堿的反應產生硫代膽堿的速率為勻速反應，因此在動力學模式下通過比較對照溶液和樣品提取液中乙酰膽堿酯酶與碘化乙酰硫代膽堿的反應速率，計算酶抑制率，對國標方法進行優化，消除人工操作不同步帶來的誤差，從而快速、準確測定中水果蔬菜中農藥殘留。

本發明所采用的技術方案是，動力學分析檢測水果蔬菜中農藥殘留的檢測方法，其特殊之處在于，具體按照以下步驟實施：

步驟1、試液的配置；

分別配置緩沖溶液、顯色溶液和乙酰膽堿酯酶溶液；

步驟2、樣品液的制備；

選取被測樣本，加入適量步驟1中所述的緩沖溶液，經振搖后靜置，再提取上清液，所述上清液為樣品液；

步驟3、對照液的測定；

取2mL～10mL步驟1中得到的緩沖溶液，加入步驟1中得到的乙酰膽堿酯酶溶液0.1mL～0.2mL，搖勻后于30～40℃水浴鍋中放置5～15min，再加入步驟1中得到的顯色溶液0.1mL～0.2mL并搖勻得到對照液；在動力學模式下測定該對照液的吸光度；通過吸光度計算對照液吸光度變化速率k1；

步驟4、樣品液的測定；

向步驟2中所得到的樣品液中加入2～10mL所述緩沖溶液，再加入步驟1中得到的乙酰膽堿酯酶溶液0.1mL～0.2mL，搖勻后于37℃水浴鍋中放置5～15min，然后加入步驟1中得到的顯色溶液0.1mL～0.2mL并搖勻得到測試液；在動力學模式下測定該測試液的吸光度；通過吸光度計算測試液吸光度變化速率k2；

步驟5、計算酶抑制率，進行結果判定；