[發明專利]一種用于鑒定方格星蟲遺傳性別的探針及方法

有效

• 申請號: 201911036273.0
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110734968B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 李文華;吳雅琴;陳琪薇
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 陳雪瑩

1.一種用于鑒定方格星蟲遺傳性別的探針，其特征在于，探針包括引物F1：GCAGATTCTTCGGGTACTGTTC，引物R1：AGGAGAGATGGTTGTGGGACT。

2.一種用于鑒定方格星蟲遺傳性別的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）抽取方格星蟲體腔液，用于提取mRNA；

（2）在體腔液中按1：5比例加入Trizol溶液，在4℃下離心；

（3）加入的氯仿，混勻，室溫下靜置；然后于4℃下離心；

（4）取上清，加入異丙醇，混勻，離心；

（5）棄上清，加入75%乙醇，混勻，離心；

（6）棄上清，在酒精燈附近將離心管晾干，晾干后加入水，溶解所獲得的mRNA，使用Nanodrop1000定量，并進行瓊脂糖凝膠電泳確定mRNA質量；

（7）使用cDNA合成試劑盒進行逆轉錄；

（8）采用權利要求1所述的引物F1和R1進行PCR擴增；

（9）PCR產物瓊脂糖凝膠電泳：將PCR產物加入上樣緩沖液，進行瓊脂糖凝膠電泳，使用凝膠成像系統拍照并記錄，擴增出現明顯條帶為雌性個體，而擴增不出條帶的為雄性個體。

3.如權利要求2所述的一種用于鑒定方格星蟲遺傳性別的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系如下：

總體積20 μl

cDNA模板 1 μl

F1（10 pmol/μl） 0.5 μl

R1（10 pmol/μl） 0.5 μl

2xTaq buffer mix（Vazyme） 10 μl

無菌水 15 μl，

PCR反應程序為：95℃預變性30秒，95℃ 30秒，58℃ 30秒，72℃ 30秒，39個循環，72℃延伸2分鐘。