[發明專利]一種血塞通注射劑物質基礎數據庫的建立方法

在審

• 申請號: 201911035327.1
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN112750509A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 朱常成;劉暘;楊兆祥;李修齊;李寧
• 申請（專利權）人: 昆藥集團股份有限公司
• 主分類號: G16C20/62
• 分類號: G16C20/62
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種血塞通注射劑物質基礎數據庫的建立方法，其特征在于，包括如下步驟：

分別取供試品溶液和對照品溶液，利用UPLC-Orbitrap HRMS進行分離和鑒定，所述UPLC-Orbitrap HRMS的色譜條件和質譜條件如下：

色譜條件：Brige Shield RP18色譜柱；流動相A為0.08vt％～0.12vt％甲酸水溶液，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序為：0min，18％B；10min，18％B；28min，26％B；51min，30％B；67min，39％B；85min，64％B；

質譜條件：

工作模式：ESI^-，Full MS/dd-MS²(TopN)模式，掃描范圍m/z 150～2000，分辨率60000～80000；

離子源參數：鞘氣流速60～70arb，輔助氣流速15～25arb，吹掃氣流速3～5arb，噴霧電壓2.0～3.0kV，毛細管溫度280～320℃，S-lens電壓45～55V，加熱溫度450～550℃；

根據CID裂解所產生的中性丟失碎片，判斷對照品所連接糖基種類與數量，同時推斷端基位糖基類別；

供試品中未知化合物根據高分辨質譜數據預測分子組成，并根據其多級質譜碎片信息推斷化合物所連接糖基個數與種類，與已知化合物的分子質量、化學結構、保留時間和質譜裂解行為比對，進行化合物推斷；

所得質譜圖、MSn質譜樹、色譜圖、化學結構和未知化合物特性的自定義庫利用Database Manager建立數據庫。

2.根據權利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述對照品為：從血塞通注射劑樣品中分離出15種皂苷成分RSZG-1～RSZG-15，并分別鑒定為三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、20(S)-人參皂苷Rf、20(S)-人參皂苷Rh1、20(S)-人參皂苷Rg2、人參皂苷Rb1、20(S)-人參皂苷F1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb3、人參皂苷Rd、人參皂苷Rk3、人參皂苷Rh4、人參皂苷Rg3，作為對照品溶液成分。

3.根據權利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述從血塞通注射劑樣品中分離出15種皂苷單體RSZG-1～RSZG-15具體為：

采用D101大孔樹脂對血塞通注射劑樣品水溶液進行分離，依次用水、30vt％乙醇水溶液、50vt％乙醇水溶液、70vt％乙醇水溶液、90vt％乙醇水溶液洗脫，得到50vt％乙醇洗脫液、70vt％乙醇洗脫液、90vt％乙醇洗脫液；

所述50vt％乙醇洗脫液經MDS柱色譜，用30vt％～90vt％甲醇水溶液進行梯度洗脫得到三個部位Fr.1、Fr.2、Fr.3；

所述Fr.1經MCI柱色譜，用40vt％～60vt％甲醇水溶液進行梯度洗脫得到兩個流分Fr.1.1、Fr.1.2，所述Fr1.1通過50％乙醇水溶液重結晶得RSZG-12；所述Fr.1.2經RP-ODS柱色譜，用40vt％～65vt％甲醇水溶液進行梯度洗脫，再經Sephadex LH-20柱純化得RSZG-11、RSZG-13；

所述Fr.2經硅膠柱色譜，用體積比為(100：18：0.5)～(80：20：0.1)氯仿-甲醇-水梯度洗脫得2個流分Fr.2.1、Fr.2.2；所述Fr.2.1經Sephadex LH-20柱純化得RSZG-10；所述Fr.2.2經半制備液相色譜純化得RSZG-4、RSZG-5；

所述Fr.3經RP-ODS反相柱色譜，用40vt％～60vt％甲醇水溶液進行梯度洗脫，再經反復Sephadex LH-20柱色譜純化得RSZG-1、RSZG-9；

所述70vt％乙醇洗脫液經硅膠柱色譜，用體積比為(100：3：0.1)～(7：3：0.5)氯仿-甲醇-水梯度洗脫得Fr.4、Fr.5、Fr.6；所述Fr.4經反復硅膠色譜、Sephadex LH-20柱色譜純化得到RSZG-3；所述Fr.5經ODS反相柱色譜，用65vt％～85vt％甲醇水溶液進行梯度洗脫得2個流分Fr.5.1、Fr.5.2；所述Fr.5.1經Sephadex LH-20柱色譜純化得RSZG-8；所述Fr.5.2經半制備液相色譜純化得RSZG-6、RSZG-7；所述Fr.6經MDS反相柱色譜，用55vt％甲醇水溶液洗脫，再經甲醇重結晶得RSZG-2；

所述90vt％乙醇洗脫液經硅膠柱色譜，用體積比為100：(1～50)：50石油醚-乙酸乙酯進行梯度洗脫，所述石油醚的溫度為60～90℃，再經反復Sephadex LH-20柱色譜純化得RSZG-14、RSZG-15。