[發(fā)明專利]一種檢測降鈣素原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法

有效

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• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN110794017B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈洪英;鞠熀先;魏琴;丁慧;范大偉;張勇;孫旭;曹偉;王雪瑩;姜娜;匡軒;王斌
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/327
• 分類號(hào): G01N27/327;G01N27/30;G01N33/68
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 趙鳳

本發(fā)明涉及，一種鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅檢測降鈣素原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法,屬于電化學(xué)免疫傳感器領(lǐng)域。本發(fā)明以鉑納米粒子功能化的花狀氧硫化銅作為基底材料，以含有雙氧水的磷酸緩沖溶液作為底液，采用電化學(xué)傳感器的層層修飾方法，構(gòu)建了信號(hào)減弱型電化學(xué)免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了在1.0 fg/mL~50.0 ng/mL線性范圍內(nèi)對降鈣原的靈敏檢測，檢測限為0.33 fg/mL。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測降鈣素原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法。具體是采用鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅作為傳感平臺(tái)，獲得了一種檢測降鈣素原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，屬于電化學(xué)免疫傳感領(lǐng)域。

背景技術(shù)

降鈣素原( Procalcitonin，PCT) 是無激素活性的降鈣素前肽糖蛋白，在嚴(yán)重系統(tǒng)感染特別是細(xì)菌感染的條件下，釋放到患者循環(huán)系統(tǒng)的可溶性蛋白。正常生理狀態(tài)下，CALC-1基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的PCT局限于甲狀腺C細(xì)胞及肺的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞κ細(xì)胞上，PCT在健康人體內(nèi)濃度非常低，且男性體內(nèi)PCT水平高于女性。PCT反映了全身炎癥反應(yīng)的活躍程度，影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小和類型、細(xì)菌的種類、炎癥的程度和免疫反應(yīng)的狀況。 PCT濃度的升高出現(xiàn)嚴(yán)重休克、全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和多器官功能紊亂綜合征(MODS)等一系列癥狀。PCT是診斷是監(jiān)測細(xì)菌炎性疾病感染的一個(gè)重要參數(shù)。因此，準(zhǔn)確檢測血清中PCT對炎癥的早期診斷至關(guān)重要并且對進(jìn)一步指導(dǎo)治療具有重要意義，如何實(shí)現(xiàn)對降鈣素原高效準(zhǔn)確的檢測是目前急需解決的問題。

電化學(xué)免疫傳感器通常是用于解決超痕量重要疾病標(biāo)記物和環(huán)境污染物等的檢測手段。免疫傳感器是基于抗原和抗體之間的特異性結(jié)合。它是一種用來分析或確定一種特定的物質(zhì)的化學(xué)測試手段。其中分析物通常是在血液或者是體液中。這種結(jié)合分析具有較高的敏感性和較好的特異性。鉑納米粒子作為一種貴金屬納米粒子其具有一系列優(yōu)良特性，如小尺寸、生物相容性好、導(dǎo)電性好和催化活性優(yōu)異等。這一系列優(yōu)點(diǎn)使其在電化學(xué)免疫傳感器中得到了越來越多的應(yīng)用。并且鉑納米粒子可以直接和抗體通過化合建相結(jié)合，操作簡單。氧硫化銅作為載體是一種納米材料其具有許多優(yōu)點(diǎn)，其中花狀的氧硫化銅具有褶皺的形貌，這種褶皺形貌可以固載更多的鉑納米粒子從而增加了抗體的固載而提高信號(hào)。因此，鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅作為基底材料構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器對提高傳感器的性能具有重要作用。本發(fā)明采用無標(biāo)記型電化學(xué)免疫傳感器，結(jié)合放大技術(shù)，提高了傳感器靈敏度和檢測限，實(shí)現(xiàn)了對降鈣素原的快速高效檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是合成花狀氧硫化銅納米材料，在合成的過程中通過調(diào)節(jié)三水合硝酸銅、硫代乙酰胺和肼的量合成不同形貌的花狀氧硫化銅納米材料。

本發(fā)明的目的之二是合成具有優(yōu)異催化性能的鉑納米粒子作為抗體的載體，其中鉑納米粒子具有均勻尺寸和大量催化位點(diǎn)的等優(yōu)異的催化性能，從而增大催化信號(hào)。

本發(fā)明的目的之三是合成鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅納米材料，其中在合成的過程中通過調(diào)節(jié)鉑納米粒子溶液的濃度可合成不同濃度的鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅納米材料。

本發(fā)明的目的之四是以鉑納米粒子功能化花狀氧硫化銅作為基底材料大量固載捕獲抗體，以降鈣素原抗原作為目標(biāo)分析物，利用抗原-抗體之間的免疫反應(yīng)，構(gòu)建信號(hào)減弱型電化學(xué)免疫傳感器，根據(jù)降鈣素原抗原固定在在電極表面前后電化學(xué)信號(hào)的變化，實(shí)現(xiàn)對降鈣素原的定量檢測。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

1. 本發(fā)明所述的一種檢測降鈣素原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，所述電化學(xué)免疫傳感器。制備步驟如下：

（1）將直徑為4 mm的玻碳電極分別用0.05、0.3和1.0 mm氧化鋁粉打磨拋光至鏡面，再用超純水洗滌干凈；

（2）鉑納米粒子功能化氧硫化銅是利用400 μL鉑納米粒子和2 mL的2.0 mg/mL氧硫銦化銅室溫下振蕩24 h，離心，溶解于2 mL的去離子水；