[發明專利]一種新城疫病毒抗體磁免疫化學發光檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201911034672.3
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110672844A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 楊海;計夢琴;楊寶鳳;張德軍;成詩琦
• 申請（專利權）人: 華中科技大學;武漢納達康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 42201 華中科技大學專利中心
• 代理人: 孫楊柳;李智

本發明公開了一種新城疫病毒抗體磁免疫化學發光檢測試劑盒及其應用，屬于免疫學檢測領域。試劑盒含有酶標抗IgY抗體、磁標新城疫病毒抗原和發光底物液。先將磁標新城疫病毒抗原分別與稀釋后的血清樣本和標準品溶液混勻，形成磁標新城疫病毒抗原與新城疫病毒抗體復合物，然后進行磁分離，將沉淀物清洗后，將酶標抗體加入到沉淀物中，與復合物上的抗體結合，然后進行磁分離和沉淀物的清洗，再加入發光底物液，使發光底物與結合到復合物上的酶標抗體上的的酶反應，檢測發光值，以加入標準品溶液的發光值繪制標準曲線，以加入待檢測樣品的發光值計算待測樣品中抗體的含量。采用所述的試劑盒檢測抗體，具有靈敏度和準確度高以及特異性強的效果。

技術領域

本發明屬于免疫學檢測領域，特別地，涉及一種新城疫病毒抗體磁免疫化學發光檢測試劑盒及其應用。

背景技術

新城疫病毒(NDV)，有些地方稱之為禽副粘病毒I型(APMV-1)，為副粘病毒科的腮腺炎病毒數。NDV的基因組是一條全程15156kb的單鏈負股RNA，分子量在5.2×10⁶～5.6×10⁶之間，可編碼6種特異性結構蛋白。病毒顆粒具有雙層包膜結構，該包膜由受感染機體細胞外膜的脂類與病毒的糖蛋白結合而衍生得到的。病毒顆粒內含一多盤繞的竹狀衣殼，囊膜表面的糖蛋白具有血凝素和神經酰胺酶活性。

新城疫俗稱“雞瘟”，新城疫病毒的強毒株引起多種禽類急性、高接觸性、致死性傳染病。由于其傳播快、死亡率高，給禽養殖業帶來毀滅性打擊，造成非常嚴重的影響，國際獸疫局(OIE)將新城疫列為A類傳染病，我國農業部也將其列為動物的一類疫病和優先防控的動物重大疫病之一。

目前，我國大多數畜禽養殖場都進行了新城疫病毒疫苗的免疫接種，為了了解ND免疫狀況，經常采用ND抗體水平來檢測禽類的免疫效果。其中血清學診斷技術中最為流行的是血凝抑制實驗，但該技術對操作人員的專業素質要求較高，過程繁瑣，對結果的判定也有較強的的主觀性，且對實驗環境也有一定的要求，基本不能實現高通量的檢測，而禽類養殖一般規模、養殖密度較大，需要檢測的樣本量也較大。因此，迫切需要開發一種操作簡單、高靈敏度、高準確度、高通量的檢測方法。

發明內容

本發明解決了現有技術中新城疫病毒抗體檢測特異性不強、靈敏度和準確度不高的技術問題，提供了一種新城疫病毒抗體磁免疫化學發光檢測試劑盒及其應用。試劑盒中含有酶標二抗、磁標新城疫病毒抗原和發光底物液，磁標新城疫病毒抗原能與血清中的新城疫病毒抗體特異性結合，酶標二抗的抗體部分能與血清中的新城疫病毒抗體結合，酶標二抗的酶部分能與所述發光底物液中的發光底物發生反應，使所述發光底物發光。本發明提供的試劑盒應用于檢測新城疫抗體時，具有較高的靈敏度、特異性和準確度的效果，而且實現了全自動化檢測，縮短檢測時間，提高檢測通量，減少人為操作誤差。

按照本發明的第一方面，提供了一種新城疫病毒抗體磁免疫化學發光檢測試劑盒，所述試劑盒含有酶標抗IgY抗體、磁標新城疫病毒抗原和發光底物液；

所述磁標新城疫病毒抗原能與血清中的新城疫病毒抗體特異性結合；所述酶標抗IgY抗體的抗體部分能與血清中的新城疫病毒抗體結合，所述酶標抗IgY抗體的酶部分能與所述發光底物液中的發光底物發生反應，使所述發光底物發光；

所述試劑盒用于定量檢測禽類動物血清中的新城疫病毒抗體。

優選地，所述酶標抗IgY抗體為堿性磷酸酶標抗IgY抗體，所述發光底物液中的發光底物為3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2- 二氧環乙烷。

優選地，所述酶標抗IgY抗體為辣根過氧化物酶標抗IgY抗體，所述發光底物液中的發光底物為3-氨基苯二甲酰肼。

優選地，所述磁標新城疫病毒抗原為核殼結構；所述核殼結構的內核為超順磁性納米顆粒，所述核殼結構的外殼為新城疫病毒抗原和新城疫病毒抗原位點之外的封閉蛋白；所述超順磁性納米顆粒與所述新城疫病毒抗原和封閉蛋白通過共價結合和疏水作用連接。