[發(fā)明專利]一種新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911034672.3
• 申請(qǐng)日: 2019-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN110672844A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊海;計(jì)夢(mèng)琴;楊寶鳳;張德軍;成詩(shī)琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué);武漢納達(dá)康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/68;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 42201 華中科技大學(xué)專利中心
• 代理人: 孫楊柳;李智

1.一種新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有酶標(biāo)抗IgY抗體、磁標(biāo)新城疫病毒抗原和發(fā)光底物液；

所述磁標(biāo)新城疫病毒抗原能與血清中的新城疫病毒抗體特異性結(jié)合；所述酶標(biāo)抗IgY抗體的抗體部分能與血清中的新城疫病毒抗體結(jié)合，所述酶標(biāo)抗IgY抗體的酶部分能與所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物發(fā)生反應(yīng)，使所述發(fā)光底物發(fā)光；

所述試劑盒用于定量檢測(cè)禽類動(dòng)物血清中的新城疫病毒抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)抗IgY抗體為堿性磷酸酶標(biāo)抗IgY抗體，所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物為3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧環(huán)乙烷。

3.如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)抗IgY抗體為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)抗IgY抗體，所述發(fā)光底物液中的發(fā)光底物為3-氨基苯二甲酰肼。

4.如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述磁標(biāo)新城疫病毒抗原為核殼結(jié)構(gòu)；所述核殼結(jié)構(gòu)的內(nèi)核為超順磁性納米顆粒，所述核殼結(jié)構(gòu)的外殼為新城疫病毒抗原和新城疫病毒抗原位點(diǎn)之外的封閉蛋白；所述超順磁性納米顆粒與所述新城疫病毒抗原和封閉蛋白通過(guò)共價(jià)結(jié)合和疏水作用連接。

5.如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有標(biāo)準(zhǔn)品溶液、樣本稀釋液和濃縮洗滌液。

6.如權(quán)利要求2所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶標(biāo)抗IgY抗體通過(guò)以下方法制備得到，包括以下步驟：

(1)將活化劑加入到堿性磷酸酶中，使所述堿性磷酸酶上引入馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)，得到活化的堿性磷酸酶；

(2)將還原劑加入到抗IgY抗體中，使所述抗IgY抗體中的二硫鍵斷開，從而暴露出具有活性的巰基，得到具有活性巰基的抗IgY抗體，將該具有活性巰基的抗IgY抗體與步驟(1)得到的活化的堿性磷酸酶進(jìn)行混合，在2℃-4℃條件下，使所述活化的堿性磷酸酶與所述具有活性巰基的抗IgY抗體發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，再依次加入馬來(lái)酰亞胺溶液和乙醇胺溶液，終止偶聯(lián)反應(yīng)，即得到堿性磷酸酶標(biāo)抗IgY抗體；

或者將N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰硫基乙酸酯加入到抗IgY抗體中，使所述抗IgY抗體上引入惰性巰基，再加入羥胺溶液，使所述惰性巰基活化，得到具有活性巰基的抗IgY抗體，將該具有活性巰基的抗IgY抗體與步驟(1)得到的活化的堿性磷酸酶進(jìn)行混合，在2℃-4℃條件下，使所述活化的堿性磷酸酶與所述具有活性巰基的抗IgY抗體發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，即得到堿性磷酸酶標(biāo)抗IgY抗體。

7.如權(quán)利要求6所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述活化劑為4-(N-馬來(lái)酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯；所述還原劑為二硫蘇糖醇；所述偶聯(lián)反應(yīng)的時(shí)間為16h-18h。

8.如權(quán)利要求6所述的新城疫病毒抗體磁免疫化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述抗IgY抗體為羊抗IgY抗體。