[發明專利]一種用于檢測水稻惡苗病藤倉赤霉菌的RPA引物及檢測方法在審
| 申請號: | 201911033864.2 | 申請日: | 2019-10-25 |
| 公開(公告)號: | CN111378776A | 公開(公告)日: | 2020-07-07 |
| 發明(設計)人: | 遲元凱;趙偉;戚仁德;葉夢迪;崔曉芳;汪濤 | 申請(專利權)人: | 安徽省農業科學院植物保護與農產品質量安全研究所 |
| 主分類號: | C12Q1/6895 | 分類號: | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司: | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人: | 高寧馨 |
| 地址: | 230031 安*** | 國省代碼: | 安徽;34 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 用于 檢測 水稻 惡苗病藤倉赤 霉菌 rpa 引物 方法 | ||
1.一種用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉的RPA引物,其特征在于:
所述的RPA引物的上游引物Ff-PRA-F如SEQ ID No.1所示,
所述的RPA引物的下游引物Ff-PRA-R如SEQ ID No.2所示。
2.一種用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉的檢測方法,其特征在于:
包括以下步驟:
(1)提取樣品中的DNA;
(2)以步驟(1)提取的DNA作為待檢測DNA模板,采用權利要求1所述的RPA引物,在RPA反應管中進行RPA擴增反應;
(3)分析RPA擴增產物。
3.根據權利要求2所述的用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉菌的檢測方法,其特征在于:步驟(1)中所述的樣品為水稻植株樣本或待測病原菌培養物。
4.根據權利要求2所述的用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉菌的檢測方法,其特征在于:所述的RPA引物的檢出下限為10pg DNA/μL。
5.根據權利要求2所述的用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉菌的檢測方法,其特征在于:步驟(2)中RPA擴增反應的反應體系以50μL計為:
6.根據權利要求2所述的用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉菌的檢測方法,其特征在于:步驟(2)中RPA擴增反應的反應條件為:37℃-39℃下反應20min-40min,隨后冰上終止反應。
7.根據權利要求2所述的用于檢測水稻惡苗病病原藤倉赤霉菌的檢測方法,其特征在于:步驟(3)中分析RPA擴增產物的方法包括如下步驟:取RPA擴增產物5μL,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,如果獲得高度為262bp的單一條帶,說明待測樣本中含有藤倉赤霉菌。
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