[發(fā)明專利]一種金色裂葉樺的創(chuàng)制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911031884.6
• 申請日: 2019-10-28
• 公開（公告）號: CN110734914B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊蘊(yùn)力;劉桂豐;姜靜;冮慧欣;陳肅;顧宸瑞;李慧玉;黃海嬌;董京祥
• 申請（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/12;A01H6/00
• 代理公司: 北京盛詢知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11901
• 代理人: 張海青

本發(fā)明公開了一種金色裂葉樺的BpGLK基因，所述BpGLK基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；該基因表達(dá)的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。還公開了一種金色裂葉樺pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，包含所述的BpGLK基因。還公開了一種金色裂葉樺的創(chuàng)制方法，包括以下步驟：根據(jù)所述的BpGLK基因的保守序列，構(gòu)建pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入裂葉樺，使得轉(zhuǎn)基因裂葉樺中的BpGLK基因低量表達(dá)，葉片呈現(xiàn)黃色。該創(chuàng)制方法通過基因工程育種手段干擾BpGLK基因的表達(dá)，進(jìn)而降低BpGLK在轉(zhuǎn)基因裂葉樺中的表達(dá)水平，獲取黃色葉片的裂葉樺，是創(chuàng)制裂葉樺新品種的有效方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金色裂葉樺的創(chuàng)制方法。

背景技術(shù)

裂葉樺(Betula pendula'Dplecprlicp')又稱裂葉垂枝樺，是來自歐洲白樺中的一個(gè)品種，它除了樹干潔白、葉片綠色，枝條下垂外，其最明顯的是葉片呈現(xiàn)多裂狀，似茶條槭(Acer ginnala Maxim.)，觀賞價(jià)值很高。

隨著社會的進(jìn)步、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們對彩色樹種的重視程度也在逐年上升，傳統(tǒng)的廣譜性的單一綠色已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們在綠化工程中的需求，在進(jìn)行園林植物配置時(shí)，向更豐富的彩葉植物品種轉(zhuǎn)變已經(jīng)成為發(fā)展的總趨勢。其中黃葉觀賞植物是彩葉植物中的重要組成部分，黃色葉片是自然界中最醒目、明度最高的色彩，其應(yīng)用前景廣闊。金葉裂葉樺的創(chuàng)制方法，在園林植物配置中，可以豐富構(gòu)圖、調(diào)整色彩、形成絢麗的圖案和不同的季相結(jié)果。在目前城市綠化中成為新寵，發(fā)展前景廣闊。

鑒于構(gòu)建彩色植物的需求，而現(xiàn)有技術(shù)中目前又尚無利用基因工程創(chuàng)制彩色裂葉樺的相關(guān)報(bào)道，因此，本發(fā)明提出了一種金葉裂葉樺的創(chuàng)制方法，為其他樺樹新品種創(chuàng)制提供參考。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種金色裂葉樺的BpGLK基因，該基因調(diào)控葉片顏色。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種由金色裂葉樺的BpGLK基因編碼的蛋白質(zhì)。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種金色裂葉樺pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，其攜帶BpGLK基因201bp保守序列，轉(zhuǎn)入裂葉樺中，并使BpGLK基因低量表達(dá)，葉片呈現(xiàn)黃色。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種金色裂葉樺的創(chuàng)制方法，通過構(gòu)建pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將該載體導(dǎo)入裂葉樺，使得轉(zhuǎn)基因裂葉樺中的BpGLK基因低量表達(dá)，葉片呈現(xiàn)黃色，創(chuàng)制裂葉樺新品種。

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種所述的金色裂葉樺的BpGLK基因的應(yīng)用，創(chuàng)制具有黃色葉片的裂葉樺。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種金色裂葉樺的BpGLK基因，所述BpGLK基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發(fā)明還提供一種由所述的金色裂葉樺的BpGLK基因編碼的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本發(fā)明還提供一種金色裂葉樺pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，包含所述的BpGLK基因201bp保守序列。

本發(fā)明還提供一種金色裂葉樺的創(chuàng)制方法，包括以下步驟：根據(jù)所述的BpGLK基因201bp的保守序列，構(gòu)建pGLKRNAi干擾表達(dá)載體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入裂葉樺，使得轉(zhuǎn)基因裂葉樺中的BpGLK基因低量表達(dá)，葉片呈現(xiàn)黃色。

優(yōu)選的是，pGLKRNAi干擾表達(dá)載體具體構(gòu)建方法，包括以下步驟：

步驟1：以野生型白樺的葉片cDNA為模板，BpGLK_F_BamHI和BpGLK_R_XbaI為引物，獲得BpGLK目的片段；