[發明專利]一種檢測牛C型流感病毒的引物對、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201911025714.7
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110616280A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 于志君;朱彤;高月花;吳家強;陳為京
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司
• 代理人: 鄭平

本發明提供一種檢測牛C型流感病毒的引物對、試劑盒及其應用，屬于生物工程和分子檢測技術領域。所述引物對由引物F1和引物R1組成。采用本發明提供的引物對、試劑盒進行檢測，檢測方法簡便快捷，重復性好，敏感度高，特異性強，可以實現大通量樣品的檢測，從而實現對牛C型流感病毒進行快速的、高敏感度的實時熒光定量PCR檢測；便于基層操作和應用，對于牛C型流感病毒疫病診斷和流行病學調查具有重大的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物工程和分子檢測技術領域，具體涉及一種檢測牛C型流感病毒的引物對、試劑盒及其應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

流感病毒屬于正黏病毒科的成員，是一種單鏈負義RNA病毒。流感病毒依據序列差異和抗原性不同可以分為A、B、C、D四型。流感病毒對畜牧業和公共衛生安全均構成重要威脅，近百年來曾在全球引發四次流感大流行，對經濟社會發展和公眾健康造成嚴重危害。C型流感病毒作為流感病毒的一種，與A、B型流感病毒的基因組均由8個基因節段組成不同，C型流感病毒的基因組由7個基因組成，分別是PB2、PB1、P3、HE、NP、MP和NS組成，分別編碼PB2、PB1、P3、HE、NP、M1、CM2、NS1和NS2九種病毒蛋白；其中HE基因是C型流感病毒的抗原基因，編碼病毒表面唯一的糖蛋白HE蛋白，是區分C型流感病毒和D型流感病毒的關鍵基因。

A、B、C、D四型流感病毒均可以感染人。其中A型流感病毒和B型流感病毒是人類季節性流感病毒的主要成員，每年在全世界都會引發30萬-50萬人死亡，對公共衛生安全構成嚴重威脅，受到重點關注；研究表明，人季節性A型流感病毒最初是由動物流感病毒跨種傳播而來，而后經過多次重配，目前形成H1N1和H3N2兩種主要亞型。牛作為D型流感病毒的自然宿主，在D型流感病毒發現之前長期被研究者所忽略。然而目前研究發現，牛不但可以感染流感病毒，而且牛群中流感流行率較高，此外，研究者還發現了人感染牛流感病毒的血清學證據，這提示我們牛流感病毒存在跨種感染人和其它動物的風險，應加強對牛流感病毒的監測和研究工作。近年來的研究發現，除了D型流感病毒可以感染牛以外，原本只在人群中流行的C型流感病毒也在牛群中被分離到，提示牛C型流感病毒有跨種感染人的風險，對公共衛生安全構成潛在威脅。因此，加強對牛C型流感病毒的監測和研究工作可以做到關口前移，從流感病毒出現的源頭獸群中及時發現有跨種傳播威脅的牛C型流感病毒株，增強我們防控新發流感疫情的能力。

開展對牛C型流感病毒的監測，需要建立特異、靈敏、快速的檢測方法，熒光定量PCR檢測方法符合這一要求。由于牛C型流感病毒基因組序列與人牛C型流感病毒存在較大差異，直接使用人牛C型流感病毒熒光定量檢測引物去檢測牛C型流感病毒容易發生漏檢，造成假陰性的情況出現，不利于牛C型流感病毒監測工作和研究工作的開展。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種檢測牛C型流感病毒的引物對、試劑盒及其應用。本發明針對近年來新發現的牛C型流感病毒基因組來設計熒光定量檢測引物；此外，考慮到D型流感病毒也可感染牛，而D型流感病毒的基因組組成又與牛C型流感病毒相同，因此在檢測牛C型流感病毒時存在誤檢D型流感病毒的可能；因此本發明選擇可以有效區分牛C型流感病毒和D型流感病毒的抗原基因HE基因作為靶基因來設計熒光定量檢測引物，從而獲得一種特異性強、靈敏度高以及重復性好的檢測牛C型流感病毒的熒光定量PCR引物對及相應試劑盒，從而完成本發明。

為實現上述技術目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明的第一個方面，提供一種引物對，所述引物對由引物F1和引物R1組成。

所述引物F1為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；