[發明專利]一種檢測牛C型流感病毒的引物對、試劑盒及其應用在審
| 申請號： | 201911025714.7 | 申請日： | 2019-10-25 |
| 公開（公告）號： | CN110616280A | 公開（公告）日： | 2019-12-27 |
| 發明（設計）人： | 于志君;朱彤;高月花;吳家強;陳為京 | 申請（專利權）人： | 山東省農業科學院家禽研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司 | 代理人： | 鄭平 |
| 地址： | 250023 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 流感病毒 檢測 試劑盒 實時熒光定量PCR 應用 分子檢測技術 流行病學調查 高敏感度 特異性強 疫病診斷 敏感度 種檢測 生物工程 基層 | ||
1.一種引物對，其特征在于，所述引物對由引物F1和引物R1組成；
所述引物F1為如下(a1)或(a2)：
(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；
所述引物R1為如下(a3)或(a4)：
(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。
2.權利要求1所述引物對的用途如下：
(b1)鑒定或輔助鑒定牛C型流感病毒；
(b2)鑒定或輔助鑒定待測樣本中是否含有牛C型流感病毒。
3.權利要求1所述引物對在制備試劑盒中的應用；
所述試劑盒的用途如下：
(b1)鑒定或輔助鑒定牛C型流感病毒；
(b2)鑒定或輔助鑒定待測樣本中是否含有牛C型流感病毒。
4.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述引物對；
優選的，所述試劑盒的用途如下：
(b1)鑒定或輔助鑒定牛C型流感病毒；
(b2)鑒定或輔助鑒定待測樣本中是否含有牛C型流感病毒。
5.如權利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性標準質粒。
6.如權利要求5所述試劑盒，其特征在于，所述陽性標準質粒為由牛C型流感病毒的HE基因(GenBank登錄號：MH348116.1)與載體相連后得到的重組質粒。
7.一種鑒定或輔助鑒定牛C型流感病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，采用所述引物對進行熒光定量PCR；
如果顯示陽性擴增曲線、待測病毒為候選的牛C型流感病毒，如果不滿足上述條件、待測病毒為候選的非牛C型流感病毒。
8.一種鑒定或輔助鑒定待測樣本中是否含有牛C型流感病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：以待測樣本的cDNA為模板，采用所述引物對進行熒光定量PCR；
如果均顯示陽性擴增曲線、待測樣本疑似含有牛C型流感病毒，如果不滿足上述條件、待測樣本疑似不含有牛C型流感病毒。
9.權利要求7或8所述方法，其特征在于，熒光定量PCR的反應程序包括：預變性：95℃3min；PCR反應：95℃5s，60℃15s，40個循環；融解：95℃5s，60℃1min，95℃，1個循環。
10.如權利要求7或8所述方法，其特征在于，熒光定量PCR的反應體系包括：2X TalentqPCR PreMix、引物F1 0.8μL、引物R1 0.8μL、cDNA模板2μL，加RNase-Free ddH2O至20μl；
優選的，熒光定量PCR采用SYBR GreenⅠ染料。
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