[發(fā)明專利]檢測樣本中MLL5基因相對表達量的寡核苷酸、方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911025523.0
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110699454A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發(fā)明（設計）人: 劉趙玲;李允章;王淑一
• 申請（專利權）人: 北京艾迪康醫(yī)學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 33100 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 黃素萍

本發(fā)明提供檢測樣本中MLL5基因相對表達量的方法、試劑盒和寡核苷酸，均涉及檢測用上游引物MLL5?F、檢測用上游引物MLL5?R和檢測用探針MLL5?Probe，以及針對內參基因ABL的上游引物ABL?F、下游引物ABL?R和探針ABL?Probe。本發(fā)明能夠快速檢測臨床樣本中MLL5基因相對表達量，可用于評價治療效果和預測預后。

技術領域

本發(fā)明屬于生物科學和生物技術領域，特別涉及一種檢測樣本中MLL5基因相對表達量的方法、寡核苷酸和試劑盒，采用熒光PCR技術，用于檢測腫瘤患者體內MLL5基因的表達水平。

背景技術

急性髓細胞白血病(AML)是一種異質性疾病，其特征是不同的復發(fā)性細胞遺傳學異常，為診斷提供最重要的預后信息。近年來，在AML中發(fā)現了FLT3、NPM1、CEBPA、IDH和WT1等多個基因的不同突變。其中的一些基因突變與細胞遺傳學正常的AML的治療結果有關，因而可作為分子指導的風險評估和分級治療的基礎。此外，對增殖、生存和分化具有重要意義的基因表達的正常調控與否也可用于預測正常核型AML患者的預后，比如MN1、BAALC、ERG和WT1。然而，大多數AML患者的預后仍不樂觀，需要尋找新的危險分層和治療靶向標志物。

MLL5基因定位于人染色體7q22區(qū)域，由25個外顯子組成，表達后的蛋白含有1858個氨基酸，而在髓細胞惡性腫瘤患者的腫瘤細胞中，它通常缺失。MLL5蛋白被劃分為MLL蛋白家族功能性成員之一，在結構上與MLL蛋白家族有一定相似性，均包含SET結構域的同源序列，MLL5蛋白缺少MLL蛋白家族中共有的A-T鉤和甲基轉移酶同源結構域，因而并不是典型的MLL蛋白家族成員。MLL5在調節(jié)造血和發(fā)育的不同方面起著重要的作用，近年來，功能分析顯示MLL5參與調節(jié)造血分化和干細胞自噬。另外，根據組蛋白H3賴氨酸4(H3K4)殘基的組蛋白甲基轉移酶活性，MLL5被證明能夠促進維甲酸誘導的人早幼粒細胞形成。

Damm等人通過采用實時逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)全面評估MLL5基因表達水平對509例重癥AML患者和48例健康個體的影響，并結合其他預后分子標志物(NPMl、FLT3及CEBPA等)檢測MLL5的預后價值。研究結果表明示，MLL5基因高表達的AML患者要比低表達者有更高的完全緩解率、更長的無病生存期期和更長的總生存期。此外，該研究還對采用大劑量化療方案獲得初次完全緩解后接受異體造血干細胞移植治療的患者與無骨髓捐獻者的療效進行分析發(fā)現，MLL5基因高表達的AML患者中，行異體造血干細胞移植的AML患者的總生存期較無骨髓捐獻的AML患者明顯縮短；而對于MLL5基因低表達的AML患者，接受異體造血干細胞移植治療的AML患者的總生存期似乎比無骨髓捐獻者更長。

Lucena—Araujo等人對急性早幼粒細胞白血病(APL)在全反式維A酸聯合蒽環(huán)類藥物化療基礎上，MLL5基因表達水平對APL患者預后影響進行分析結果顯示，MLL5基因低表達的APL患者的完全緩解率，2年總生存率及2年無病生存率均顯著低于高表達者，且差異均有統(tǒng)計學意義，且MLL5基因低表達的APL患者的2年累積復發(fā)率則顯著高于高表達者，提示了MLL5低表達可能預示著APL患者預后不良。

還有研究發(fā)現，MLL5基因在多種造血系統(tǒng)腫瘤中表達下降，如AML、急性淋巴細胞白血病(ALL)和MDS等。MLL5基因表達與細胞周期調控、DNA去甲基化的敏感程度、某些腫瘤抑制因子(比如P53和BRCA1等)的激活、血液系統(tǒng)的發(fā)育、造血干細胞的成熟及機體內穩(wěn)態(tài)等有一定關聯性。

綜上研究所述，MLL5基因在AML患者中表達下調。采用相關措施使MLL5基因表達水平升高，可增加AML患者對部分化療藥物的敏感性。隨著對MLL5基因表達水平與影響AML患者預后研究的深入，將為利用MLL5基因表達對AML進行危險分層、預后評估及療效評價提供理論依據。