[發(fā)明專利]一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911024455.6
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110724709A
• 公開（公告）日: 2020-01-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于志君;朱彤;吳家強
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 37221 濟南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 鄭平

本發(fā)明提供一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法及應(yīng)用。所述拯救方法包括：將H13N8亞型流感病毒PB2基因、PB1基因、PA基因、HA基因、NP基因、NA基因、M基因和NS基因共同導(dǎo)入宿主細(xì)胞以實現(xiàn)拯救。本發(fā)明為H13N8亞型流感病毒跨種傳播機制的研究奠定了良好基礎(chǔ)，并提供了可行的技術(shù)平臺；同時有利于制備預(yù)防/治療H13N8亞型流感病毒的相關(guān)產(chǎn)品；另外，本發(fā)明構(gòu)建方法還具有操作簡便、成本較低等優(yōu)點，因此具有良好的實際應(yīng)用之價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

本發(fā)明背景技術(shù)中公開的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

A型流感病毒是正黏病毒科流感病毒屬的成員之一，病毒基因組由8條單股負(fù)鏈分節(jié)段的RNA片段組成，8個基因片段的名稱分別為PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS。構(gòu)建流感病毒反向遺傳系統(tǒng)就是用克隆的流感病毒cDNA拯救流感病毒的過程，從基因水平上實現(xiàn)了對RNA病毒的操作，為RNA病毒的研究提供了重要手段。目前流感病毒反向遺傳系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用到流感病毒致病機制、傳播機制和基因工程疫苗候選株的研制等方面。

根據(jù)流感病毒表面糖蛋白血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的不同，流感病毒被分為18種HA亞型和11種NA亞型，其中H17、H18、N10和N11亞型的流感病毒目前只感染蝙蝠，未在其它動物中發(fā)現(xiàn)。之前研究表明，家禽可以感染除H13和H16亞型以外的其它亞型流感病毒，但一般不感染H13和H16亞型流感病毒。然而，通過流行病學(xué)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)蛋雞血清中存在H13N8亞型流感病毒的抗體，并發(fā)現(xiàn)蛋雞中的H13N8亞型流感病毒抗體極可能來自野鳥病毒的感染，提示H13N8亞型流感病毒存在跨種感染家禽的風(fēng)險。因此有必要開展H13N8亞型流感病毒對家禽致病、傳播機制的研究以及基因工程疫苗候選株的研究來幫助我們更好地理解和防控H13N8亞型流感病毒對家禽的感染，而對H13N8亞型流感病毒進(jìn)行病毒拯救可為上述研究的開展打下重要基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法及應(yīng)用。本發(fā)明首次成功成功拯救H13N8亞型流感病毒，從而為H13N8亞型流感病毒跨種傳播機制的研究及相關(guān)醫(yī)療檢測制品的研究研發(fā)奠定了良好基礎(chǔ)。

為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的第一個方面，提供一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法，所述拯救方法包括：

將H13N8亞型流感病毒的PB2基因、PB1基因、PA基因、HA基因、NP基因、NA基因、M基因和NS基因共同導(dǎo)入宿主細(xì)胞以實現(xiàn)拯救。

上述方法中，所述H13N8亞型流感病毒可以為A/black-tailed gull/Weihai/17/2016(簡稱17E1株)；

所述PB2基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述PB1基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述PA基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述HA基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述NP基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述NA基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述M基因來源于流感病毒17E1株，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；