[發明專利]一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法及應用

在審

• 申請號: 201911024455.6
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110724709A
• 公開（公告）日: 2020-01-24
• 發明（設計）人: 于志君;朱彤;吳家強
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 37221 濟南圣達知識產權代理有限公司
• 代理人: 鄭平

1.一種H13N8亞型流感病毒的拯救方法，所述拯救方法包括：

將H13N8亞型流感病毒的PB2基因、PB1基因、PA基因、HA基因、NP基因、NA基因、M基因和NS基因共同導入宿主細胞以實現拯救。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述PB2基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述PB1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述PA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述HA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述NP基因核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述NA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

所述M基因核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

所述NS基因核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，

針對所述PB2基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；

針對所述PB1基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；

針對所述PA基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示；

針對所述HA基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；

針對所述NP基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示；

針對所述NA基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示；

針對所述M基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示；

針對所述NS基因進行擴增的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PB2基因、PB1基因、PA基因、HA基因、NP基因、NA基因、M基因和NS基因是通過含有PB2基因的重組載體、含有PB1基因的重組載體、含有PA基因的重組載體、含有HA基因的重組載體、含有NP基因的重組載體、含有NA基因的重組載體、含有M基因的重組載體、含有NS基因的重組載體共同導入宿主細胞中。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，

所述含有PB2基因的重組載體為將PB2基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有PB1基因的重組載體為將PB1基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有PA基因的重組載體為將PA基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有HA基因的重組載體為將HA基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有NP基因的重組載體為將NP基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有NA基因的重組載體為將NA基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有M基因的重組載體為將M基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體；

所述含有NS基因的重組載體為將NS基因插入表達載體的多克隆位點中得到的載體。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述表達載體為pFluDD。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為293T細胞、COS7細胞、MDCK細胞、VERO細胞、HL-8細胞中的一種或多種，優選為293T細胞。

8.權利要求7所述方法構建得到的重組H13N8亞型流感病毒。

9.權利要求8所述重組H13N8亞型流感病毒的應用，包括：

1)H13N8亞型流感病毒跨種傳播機制研究；

2)制備預防/治療流感病毒產品。

10.如權利要求9所述應用，其特征在于，所述產品為藥物或者試劑盒。