[發(fā)明專利]一種測定植物中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911018573.6
• 申請(qǐng)日: 2019-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN111172237A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟伊娜;傅力;張平;吳斌;鄭素慧;吳忠紅;張健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所;韓山師范學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/48
• 分類號(hào): C12Q1/48
• 代理公司: 北京中恒高博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.一種測定植物中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作；

(2)酶液的制備；

(3)蔗糖合成酶或蔗糖磷酸合成酶活性的測定：

向試管中加入0.05M果糖溶液或F₆P溶液0.1mL，UDPG 0.1mL，0.1M Tris溶液0.1mL，0.05mL 10mM MgCl₂溶液，向空白試管中加入0.1mL 10％NaOH溶液，向所有待測樣品試管中加入酶液0.2mL；將上述試管全部放入37℃水浴中保溫30min；接著取出在沸水浴中加熱1min，流水冷卻；隨后向樣品試管中加0.1mL 10％NaOH溶液，沸水浴加熱10min，流水冷卻；接著將上述試管全部加入3.5mL 36％HCL，85℃水浴加熱10min，流水冷卻；然后將上述試管全部加入0.5mL 0.1％間苯二酚溶液，65℃水浴加熱10min，流水冷卻；接著加入4.5mL蒸餾水，搖勻；最后在480nm下比色；結(jié)果按照以下公式計(jì)算：單位為：mg·g^-1·h^-1

其中：X：標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得蔗糖含量(100μg/mL)

V1：樣品總體積(mL)

V2：測定時(shí)取酶液體積(mL)

m：樣品質(zhì)量(g)

t：酶反應(yīng)時(shí)間(h)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定植物中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量的方法，其特征在于：步驟(1)中，所述蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法為：準(zhǔn)備一系列不同濃度的蔗糖溶液，然后加入NaOH溶液，沸水浴加熱，并冷卻；接著加入HCL溶液，80℃水浴加熱，并冷卻；隨后加入間苯二酚溶液，65℃水浴加熱，并冷卻；最后在480nm下比色，以蔗糖含量為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定植物中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述酶液的制備方法為：在植物樣品中加入磷酸緩沖液并勻漿，研磨漿液，然后將研磨好的漿液離心，取上清液。