[發明專利]一種針對塔里木兔的個體識別方法

有效

• 申請號: 201911018252.6
• 申請日: 2019-10-24
• 公開（公告）號: CN110684852B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 黃婭琳;陳云霞;邱云亮;徐燕紅;郭海濤;蔣敬;周用武;費宜玲
• 申請（專利權）人: 南京森林警察學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 江蘇海越律師事務所 32402
• 代理人: 唐小紅

本發明涉及一種針對塔里木兔的個體識別方法，屬于動物的測定和檢驗技術領域。本發明提出了通過STR片段檢測及多樣性分析所篩選出的12個可用于塔里木兔個體識別的STR位點及其引物序列，并提出對這12個STR位點進行擴增和毛細管電泳檢測并分析，得到STR分型圖譜。若兩份樣本在所檢測的12個基因座存在不一致的STR分型圖譜，可排除兩份樣本的同一性，當兩份樣本在所檢測的12個基因座的STR分型完全一致時，需計算其個體識別的似然率；當似然率大于或等于1×10¹²時可認定兩份樣本的同一性。該方法可以有效解決對偷獵塔里木兔案件的準確量刑問題。

技術領域

本發明涉及一種針對塔里木兔的個體識別方法，屬于動物的測定和檢驗技術領域。

背景技術

塔里木兔(Lepus yarkandensis)屬兔形目(lagomorphs)兔科(leporidae)兔屬(lepus)。英文名為Yarkand hares。其體形較小，毛色沙黃，體長為29—43cm，尾長6—11cm，體重1.2—1.6kg，耳朵較大，耳尖不呈黑色，體毛短而直。分布于新疆塔里木盆地，北起庫爾勒、庫車；南抵和田、且末；西止阿克蘇、喀什，東達羅布洼地，幾乎所有的縣境內均有發現。塔里木兔是我國特有的一個物種，在世界范圍內的分布僅限于新疆的塔里木盆地。但近幾年來，由于人類大量捕殺，造成塔里木兔數量急劇下降，1989年被列為國家二級重點保護動物。前人對塔里木兔的研究主要是對其地理分布等資源現狀進行分析或利用線粒體DNA(mtDNA)上的部分基因片段，如控制區(D-loop)、細胞色素b(Cytb)基因進行種群遺傳多樣性分析。迄今，還沒有利用核DNA上的STR(short tandem repeat，短片段重復序列)多態性對塔里木兔進行遺傳多樣性分析的報道。

STR廣泛存在于人類及哺乳動物的基因組中，具有高度多態性，它們一般由2-6個堿基構成一個核心序列，核心序列串聯重復排列，由核心序列重復數目的變化產生長度多態性。對于一個特定的個體，染色體上某個特定位置的重復序列的重復次數是固定的，而對于不同的個體在同一位置處的重復次數可能不同，這就構成了群體中這些重復序列的多態性。由于人類及哺乳動物基因組中這種重復序列非常多，通過對這種多態性的檢測，就可以明確區分個體與個體的不同，確定父母子的親緣關系，區分不同個體的方法叫做“個體識別”，也被稱為“同一認定”。在偷獵、運輸、販賣、食用塔里木兔的野生動物案件中往往只能獲得塔里木兔的肢體、毛皮，在某些案件現場甚至只能獲得少量血痕、毛發，對塔里木兔的個體識別方法的研發將有助于識別案件中的不同肢體、尸塊、皮毛、血痕或毛發樣本來自幾只塔里木兔。作為國家二級重點保護動物，涉案塔里木兔的個體數量將直接影響量刑，如涉案塔里木兔的個數達到20只及以上即屬于非法狩獵“情節嚴重”的刑事案件。因此，對塔里木兔個體識別方法的研發將解決目前無法識別不同檢材是否來自不同個體的問題。而本發明能夠很好地解決上述的問題。

發明內容

針對上述現有技術的缺陷，本發明目的在于提出一套可用于塔里木兔個體識別的引物序列，并提出一種針對塔里木兔的個體識別方法，該方法利用STR片段檢測及多樣性分析所篩選出的12個可用于塔里木兔個體識別的STR位點，并對這12個STR位點進行擴增和毛細管電泳檢測，通過分析毛細管電泳檢測得到的分型數據和計算個體識別的證據強度，來進行塔里木兔的個體識別。該方法可以有效解決對偷獵塔里木兔案件的準確量刑問題。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下所述：

一種針對塔里木兔的個體識別方法，包括如下步驟：

(一)篩選用于個體識別的STR位點：通過STR片段檢測及多樣性分析篩選出12個可用于塔里木兔個體識別的STR位點，擴增這12個STR位點的引物序列如表1所示。其中，這12個STR位點遺傳學數據如表2、表3所示。

表1擴增塔里木兔STR位點所用引物序列

表2塔里木兔12個STR位點等位基因頻率分布表(群體樣本量n＝60)