[發明專利]基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針以及方法

在審

• 申請號: 201911005403.4
• 申請日: 2019-10-22
• 公開（公告）號: CN110607377A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 姚琳;曲夢;王聯珠;江艷華;李風鈴;郭瑩瑩;譚志軍;盧立娜
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 11689 北京智繪未來專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 郭紅燕

基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針，引物包括一對擴增引物，分別包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，5’端攜帶有熒光報告基團，3’端攜帶有熒光淬滅基團。本發明還提供鑒別犬牙南極魚的方法和實時熒光PCR檢測試劑盒，該方法和實時熒光PCR檢測試劑盒基于上述引物和探針來鑒別犬牙南極魚。本申請所提供的引物和探針能對來源于含有犬牙南極魚成分的DNA產生特異性擴增信號，而對沒有犬牙南極魚成分的DNA不發生特異性擴增。采用本發明的方法和實時熒光PCR檢測試劑盒，能夠對犬牙南極魚與其易混品種的水產品進行鑒別區分，具有準確、快速、靈敏等優點。

技術領域

本發明涉及物種檢測領域，更具體地，本發明涉及基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針、方法以及試劑盒。

背景技術

小鱗犬牙南極魚(Dissostichuseleginoides)，中文名稱犬牙南極魚、巴塔哥尼亞犬牙魚，英文名稱Patagonian toothfish，由于其肉質白皙，體型與大西洋鱈類似，在日本市場稱為“銀鱈魚”，后來這一名稱也隨著該魚在中國的大量進口與消費而在中國流行起來。實際上犬牙南極魚屬于輻鰭魚綱、鱸形目、南極魚科、犬牙南極魚屬，分類學上與真正的鱈魚沒有關系。犬牙南極魚是一種生長周期長的大型底棲魚類，成魚體長多在70-80cm左右，最大可達2m以上，體重可超過100kg。主要分布在東南太平洋和西南大西洋在阿根廷和馬爾維納斯群島周圍、智利南部海區，太平洋西南部麥克夸里島，南大洋南喬治亞島，以及澳大利亞、法國屬地、新西蘭、南非和英國所屬的亞南極區島嶼專屬經濟區和毗鄰海域。

犬牙南極魚肉質白皙、無肌間小刺、口感嫩滑、口味細品似帶有黃油混合堅果的味道，DHA含量豐富，品質獨特，受到世界發達國家或地區及新興經濟體國家或地區消費者的喜愛；加之由南極海洋生物資源保護委員會(CCAMLR)負責管理、分配有限的捕撈配額(2018年全球犬牙南極魚允許捕撈量僅有29618噸)，產量有限，因此該魚的價格一直居高不下，被稱為“白色黃金”。

犬牙南極魚捕撈后去頭去臟，并迅速在-40℃下冷凍，而后，通過低溫冷鏈運輸到全球各主要消費國。由于我國經濟的快速發展，消費者對高端水產品的需求增長巨大，我國目前成為該魚的主要進口國、消費國之一。由于該魚的價格高并且體型較大，因此進口商往往將冷凍的犬牙南極魚再次分割、切片、包裝后銷售。因此在這個過程中，具有分類學鑒定特征的魚頭、魚鰭等均隨著加工被剔除掉了，普通消費者很難通過外形特征鑒定市面上的犬牙南極魚產品。因此，一些不法分子利用犬牙南極魚產品的這個特點，用規格接近的魚切片冒充犬牙南極魚進行銷售，賺取經濟利益，這種行為嚴重違反了我國食品安全法“禁止生產經營摻假摻雜食品”的規定。更為嚴重的是，少數人用“油魚”(即棘鱗蛇鯖、異鱗蛇鯖)切片冒充銀鱈魚產品，“油魚”因含有大量人體不能消化利用的蠟酯，不少人食用后發生腹瀉，據媒體報道，已經引起了多起食品安全事件，引發了社會廣泛關注。一時間，消費者“望鱈卻步”，這種摻雜摻假的行為擾亂了正常的經濟秩序與行業發展，給消費者的健康帶來威脅。

目前基于分子生物學的方法是鑒定魚品種的主要途徑，主要步驟包括提取DNA、PCR擴增保守片段、測定序列、序列比對分析、繪制進化樹，以判斷待測樣品的物種屬性。但整個過程由于包含“測定序列”的環節，因此檢測時間一般在3-4天，時效性差，不能滿足監管、質檢在時效性方面的需求。

鑒于上述情況，急需建立一種能快速鑒定犬牙南極魚的方法作為監管執法的參考依據。

發明內容

一方面，本發明的目的在于提供基于16S rRNA基因鑒定犬牙南極魚的引物和探針。其中，引物包括一對擴增引物，分別包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。所述探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探針的5’端攜帶有熒光基團，3’端攜帶有熒光淬滅基團。