[發明專利]基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針以及方法

在審

• 申請號: 201911005403.4
• 申請日: 2019-10-22
• 公開（公告）號: CN110607377A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 姚琳;曲夢;王聯珠;江艷華;李風鈴;郭瑩瑩;譚志軍;盧立娜
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 11689 北京智繪未來專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 郭紅燕

1.基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針，其特征在于：

所述引物包括一對擴增引物，分別包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，

所述探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探針的5’端攜帶有熒光報告基團，3’端攜帶有熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針，其特征在于：所述熒光報告基團是FAM，所述熒光淬滅基團是DNA小溝結合物。

3.根據權利要求1所述的基于16S rRNA基因鑒別犬牙南極魚的引物和探針，其特征在于：所述熒光報告基團是FAM，所述熒光淬滅基團是DNA小溝結合物，所述DNA小溝結合物的3’端連接有二氫環化吲哚卟啉-三肽。

4.一種鑒別犬牙南極魚的方法，其特征在于，所述方法包括：

步驟(1)：基于所述犬牙南極魚的16S rRNA基因設計并合成引物和探針；

步驟(2)：從待檢樣品中提取DNA；以及，

步驟(3)：利用所述引物和所述探針，以所述DNA作為模板DNA，通過實時熒光PCR反應來鑒別犬牙南極魚。

5.根據權利要求4所述的鑒別犬牙南極魚的方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述引物包括一對擴增引物，分別包括SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，所述探針包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探針的5’端攜帶有熒光基團，3’端攜帶有熒光淬滅基團。

6.根據權利要求5所述的鑒別犬牙南極魚的方法，其特征在于：所述熒光基團是FAM，所述熒光淬滅基團是DNA小溝結合物。

7.根據權利要求4所述的鑒別犬牙南極魚的方法，其特征在于：

在步驟(2)中，以水產品的肌肉組織為待檢樣品進行DNA提取，以濃度為10ng/μL～100ng/μL且A₂₆₀/A₂₈₀比值在1.7～1.9范圍內的DNA作為所述模板DNA。

8.根據權利要求4所述的鑒別犬牙南極魚的方法，其特征在于：

在步驟(3)中，所述實時熒光PCR反應的條件為：95℃10min；95℃15s，60℃1min，并收集熒光信號，循環40次。

9.一種用于鑒別犬牙南極魚的實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括一對擴增引物以及探針，所述一對擴增引物分別具有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，所述探針具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，且所述探針的5’端攜帶有作為熒光報告基團的FAM，3’端攜帶有作為熒光淬滅基團的DNA小溝結合物。

10.根據權利要求10所述的實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括：含有犬牙南極魚成分的陽性對照品，不含有犬牙南極魚成分的陰性對照品。