[發(fā)明專利]可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞及其制備方法與應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911005295.0
• 申請日: 2019-10-22
• 公開（公告）號: CN110819593A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設計）人: 陳敏;王霞;周繼曾;陳晃耀;魏愈慧;藍婷;鄒慶劍;周小青;唐成程;張焜;周仁平;賴良學
• 申請（專利權）人: 五邑大學;江門市大健康國際創(chuàng)新研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;A61K35/545;A61P25/02;A61P21/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 孫浩

1.一種可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞，其特征在于，所述多能干細胞導入有Tet-On系統(tǒng)和抗凋亡基因Bcl。

2.如權利要求1所述一種可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞，其特征在于，所述Tet-On系統(tǒng)包括Ngn2、Isl1、Lhx3基因和TRE，所述Tet-On系統(tǒng)通過TRE調(diào)控Ngn2、Isl1和Lhx3基因表達。

3.一種可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括使用基因修飾技術將Tet-On系統(tǒng)和抗凋亡基因Bcl轉(zhuǎn)入多能干細胞，得到所述可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞。

4.如權利要求3所述多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述Tet-On系統(tǒng)包括Ngn2、Isl1、Lhx3基因和TRE，所述Tet-On系統(tǒng)通過TRE調(diào)控Ngn2、Isl1和Lhx3基因表達。

5.如權利要求3所述多能干細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將Tet-On系統(tǒng)和抗凋亡基因Bcl克隆到載體上，將所述載體與hiPSC進行共轉(zhuǎn)染，通過抗性篩選得到轉(zhuǎn)入了Tet-On系統(tǒng)和抗凋亡基因Bcl的多能干細胞。

6.如權利要求5所述多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述共轉(zhuǎn)染操作使用包括兩種PB載體和轉(zhuǎn)座酶，其質(zhì)量比為2:2:1。

7.如權利要求5所述多能干細胞的制備方法，其特征在于，所述抗性篩選的抗性基因為BSD抗性基因，且抗凋亡載體里面含有GFP標記，BSD篩選后的GFP陽性細胞為轉(zhuǎn)染了兩種載體的細胞。

8.一種運動神經(jīng)元的制備方法，其特征在于，加入四環(huán)素類藥物誘導如權利要求1或2所述多能干細胞定向誘導分化為運動神經(jīng)元，所述四環(huán)素類藥物包括四環(huán)素和四環(huán)素衍生物中的至少一種。

9.一種治療神經(jīng)退行性疾病藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑包括如權利要求1或2所述可定向誘導的、抗凋亡的多能干細胞。

10.如權利要求9所述的一種治療神經(jīng)退行性疾病藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑可在體內(nèi)誘導分化為運動神經(jīng)元，所述神經(jīng)退行性疾病為運動神經(jīng)元損傷性疾病。