[發(fā)明專利]紅耳龜檢測方法及用于檢測紅耳龜?shù)腜CR引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911003998.X
• 申請日: 2019-10-22
• 公開（公告）號: CN110564868B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董姍姍;章嫡妮;劉燕;張振華;盧曉強(qiáng);于賜剛
• 申請（專利權(quán)）人: 生態(tài)環(huán)境部南京環(huán)境科學(xué)研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 郝艷平

本發(fā)明提供一種紅耳龜檢測方法及用于檢測紅耳龜?shù)腜CR引物，涉及紅耳龜檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明可以通過獲取多種不同龜類對應(yīng)的多組DNA，采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，其中，正向引物KM216748F的引物序列為：5′?TCTCAATTTTCTTCTAGGGT?3′、反向引物KM216748R的引物序列為：5′?GTTAGATGTTGTGGGTTA?3′，分別對多組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，得到對應(yīng)的多組PCR產(chǎn)物，分別對多組PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，確定電泳檢測結(jié)果中存在電泳條帶的PCR產(chǎn)物對應(yīng)的DNA為紅耳龜?shù)腄NA，實現(xiàn)了對紅耳龜?shù)奶禺愋詸z測，可以為外來入侵物種紅耳龜?shù)囊巴夥植伎焖僮R別提供有效手段，能夠減少針對紅耳龜進(jìn)行防控時的耗時和成本,識別和監(jiān)測紅耳龜?shù)男矢摺?/p>

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及紅耳龜檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種紅耳龜檢測方法及用于檢測紅耳龜?shù)腜CR引物。

背景技術(shù)

紅耳龜（Trachemys scripta elegans）因人工放生等原因進(jìn)入野外自然環(huán)境，呈蔓延態(tài)勢，已嚴(yán)重威脅棲息環(huán)境的本土龜類及生物多樣性。因此，快速掌握紅耳龜野外分布狀況，開展早期的預(yù)警監(jiān)測，是對其進(jìn)行有效防控的關(guān)鍵。

目前，針對紅耳龜進(jìn)行防控所采取的方式通常為：通過野外調(diào)查、標(biāo)本采集或拍照取證等方式，對野外的紅耳龜進(jìn)行識別和監(jiān)測，從而掌握紅耳龜?shù)囊巴夥植紶顩r，進(jìn)而實現(xiàn)預(yù)警監(jiān)測。

但是，上述現(xiàn)有針對紅耳龜進(jìn)行防控所采取的方式較為耗時費力、識別和監(jiān)測紅耳龜?shù)男瘦^為低下。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種紅耳龜檢測方法及用于檢測紅耳龜?shù)腜CR引物，可以實現(xiàn)對紅耳龜?shù)目焖贆z測。

第一方面，本發(fā)明實施例提供一種紅耳龜檢測方法，包括：

獲取多種不同龜類對應(yīng)的多組脫氧核糖核酸DNA；

采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分別對多組DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)絇CR擴(kuò)增反應(yīng)，得到對應(yīng)的多組PCR產(chǎn)物；正向引物KM216748F的引物序列為：5‘-TCTCAATTTTCTTCTAGGGT-3’；反向引物KM216748R的引物序列為：5‘-GTTAGATGTTGTGGGTTA-3’；

分別對多組PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，確定電泳檢測結(jié)果中存在電泳條帶的PCR產(chǎn)物對應(yīng)的DNA為紅耳龜?shù)腄NA。

可選地，上述分別對多組PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測，包括：

采用瓊脂糖凝膠對每組PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測。

可選地，上述確定電泳檢測結(jié)果中存在電泳條帶的PCR產(chǎn)物對應(yīng)的DNA為紅耳龜?shù)腄NA，包括：

對于每組PCR產(chǎn)物對應(yīng)的電泳檢測結(jié)果：

判斷PCR產(chǎn)物對應(yīng)的電泳檢測結(jié)果中是否出現(xiàn)148堿基對bp大小的特征條帶；

若PCR產(chǎn)物對應(yīng)的電泳檢測結(jié)果中出現(xiàn)148bp大小的特征條帶，則確定PCR產(chǎn)物對應(yīng)的DNA為紅耳龜?shù)腄NA。

可選地，瓊脂糖凝膠的濃度為1.5%。

可選地，上述獲取多種不同龜類對應(yīng)的多組DNA，包括：

獲取多種不同龜類對應(yīng)的多組樣本組織；

采用丹尼斯血液和組織試劑盒DNeasy Blood Tissue Kit提取每組樣本組織的DNA，得到多組DNA。

可選地，上述采用正向引物KM216748F和反向引物KM216748R，分別對多組DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)絇CR擴(kuò)增反應(yīng)，包括：

對于每組DNA：