[發明專利]一種檢測四種腸道病毒的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201911002544.0
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN110863065A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 古柏燕;彭忠
• 申請（專利權）人: 珞可為科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

1.4種型別柯薩奇病毒核酸的檢測引物和探針，其特征在于，包括4種型別基因的特異性擴增引物序列以及與該引物相應的特異性熒光探針序列，探針序列的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團，各型別檢測引物及探針序列下：

柯薩奇病毒A9型：

上游引物CVA9-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，

下游引物CVA9-R: 核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，

特異性探針CVA9-P: 核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，

柯薩奇病毒A10型：

上游引物CVA10-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，

下游引物CVA10-R: 核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，

特異性探針CVA10-P: 核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，

柯薩奇病毒B2型：

上游引物CVB2-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，

下游引物CVB2-R: 核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，

特異性探針CVB2-P: 核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，

柯薩奇病毒B5型：

上游引物CVB5-F：核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，

下游引物CVB5-R: 核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，

特異性探針CVB5-P: 核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。

2.根據權利要求1所述的4種型別柯薩奇病毒核酸的檢測引物和探針，其特征在于，所述柯薩奇病毒A9型檢測探針、柯薩奇病毒A10型檢測探針、柯薩奇病毒B2型檢測探針、柯薩奇病毒B5型檢測探針上帶有的熒光報告基團選自6-羧基熒光素、六氯-6-甲基熒光素、VIC熒光染料、四氯-6-羧基熒光素、羧基- X - 羅丹明、6 - 羧基四甲基羅丹明、磺酰羅丹明、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基熒光素琥珀酰亞胺酯、花菁3、花菁3 .5、花菁5和花菁5 .5中的至少一種；所述柯薩奇病毒A9型檢測探針、柯薩奇病毒A10型檢測探針、柯薩奇病毒B2型檢測探針、柯薩奇病毒B5型檢測探針上帶有的熒光淬滅基團選自6-羧基四甲基羅丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、黑洞淬滅劑1、黑洞淬滅劑2或黑洞淬滅劑3中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的4種型別柯薩奇病毒核酸的檢測引物和探針，其特征在于，所述柯薩奇病毒A9型檢測探針、柯薩奇病毒A10型檢測探針、柯薩奇病毒B2型檢測探針、柯薩奇病毒B5型檢測探針上帶有的熒光報告基團選自選自6-羧基熒光素、VIC熒光染料、磺酰羅丹明和磺酰羅丹明中的一種；所述熒光淬滅基團選自黑洞淬滅劑1或黑洞淬滅劑2中的一種；作為優選，柯薩奇病毒A9型檢測探針的熒光報告基團為6-羧基熒光素, 熒光淬滅基團為BHQ1; 柯薩奇病毒A10型檢測探針的熒光報告基團為VIC熒光染料,熒光淬滅基團為BHQ1; 柯薩奇病毒B2型檢測探針的熒光報告基團為磺酰羅丹明, 熒光淬滅基團為BHQ2;柯薩奇病毒B5型檢測探針的熒光報告基團為磺酰羅丹明,熒光淬滅基團為BHQ2。

4.一種同時檢測4種型別柯薩奇病毒的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1-3任一所述的4種型別柯薩奇病毒的檢測引物和探針，其中所述柯薩奇病毒A9型檢測探針、柯薩奇病毒A10型檢測探針、柯薩奇病毒B2型檢測探針、柯薩奇病毒B5型檢測探針上分別帶有不同的熒光報告基團。

5.根據權利要求4所述的同時檢測4種型別柯薩奇病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒在使用時按以下比例配制引物、探針混合液：柯薩奇病毒A9型擴增引物對與柯薩奇病毒A9型檢測探針的摩爾比為5:1，柯薩奇病毒A10型擴增引物對與柯薩奇病毒A10型檢測探針的摩爾比為5:2，柯薩奇病毒B2型擴增引物對與柯薩奇病毒B2型檢測探針的摩爾比為2:1，柯薩奇病毒B5型擴增引物對與柯薩奇病毒B5型檢測探針的摩爾比為10:3，柯薩奇病毒A9型檢測探針、柯薩奇病毒A10型檢測探針、柯薩奇病毒B2型檢測探針、柯薩奇病毒B5型檢測探針的摩爾比為2:4:5:6。