[發明專利]一種篩選用于治療或預防polyQ相關的神經退行性疾病的化合物的方法

在審

• 申請號: 201911000415.8
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN112763718A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 魯伯塤;費義艷;丁滪;黨永軍
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;A61K31/404;A61K31/4178;A61K31/37;A61K31/517;A61P25/28;A61P25/14
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 楊勝軍

1.一種篩選或鑒定用于治療或預防polyQ相關的神經退行性疾病的化合物的方法，包括

(I)：使候選化合物與待測體系接觸，所述待測體系包含

(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段，和

(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段；和

(II)：測定所述候選化合物調節(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段與(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段之間的結合的能力，并且選擇正向調節所述結合的化合物。

2.權利要求1的方法，其中步驟(II)包括：

測定存在/不存在所述候選化合物的條件下，(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段與(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段之間的結合親和力大小，和/或

測定存在/不存在所述候選化合物的條件下，(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段與(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段的結合量。

3.權利要求1或2的方法，其中所述polyQ異常擴增蛋白包含polyQ長度≥40、≥33、≥41、≥19、≥46、≥44、≥39、≥36或≥37的polyQ部分；

優選地，所述polyQ異常擴增蛋白包含

polyQ長度≥40的ATXN1或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥33的ATXN2或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥41的ATXN3或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥19的ATXN7或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥46的ATXN12或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥44的TBP或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥39的ATN1或其含有polyQ部分的片段，

polyQ長度≥36的HTT或其含有polyQ部分的片段，或

polyQ長度≥37的AR或其含有polyQ部分的片段。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段與SEQ IDNO:6的氨基酸序列具有25％或更高、30％或更高、35％或更高、40％或更高、50％或更高、60％或更高、70％或更高、80％或更高、90％或更高、95％或更高或者100％的序列相同性。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中測定所述結合的方法選自體外拉下實驗、Split-TEV、免疫共沉淀、親和層析、復合物共純化、酶聯免疫吸附法、熒光分子篩、酵母雙雜交、HIP-HOP法、時間分辨熒光共振能量轉移、化學發光法、表面等離子體共振、等溫滴定量熱法、微量熱泳動及其任意組合；優選地，測定所述結合的方法選自體外拉下實驗、免疫共沉淀、酶聯免疫吸附法、熒光分子篩和時間分辨熒光共振能量轉移及其任意組合。

6.權利要求1-5中任一項的方法，其中在步驟(I)之前還包括對候選化合物進行親和活性預篩選的步驟，包括：

(A)：檢測候選化合物與(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段的親和結合，和/或(B)：檢測候選化合物與(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段的親和結合；以及

(C)：選擇與(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段和/或(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段能夠親和結合的化合物；

其中步驟(A)和步驟(B)可以以任何順序獨立地進行。

7.權利要求6的方法，其中

步驟(A)包括：測定候選化合物與(1)polyQ異常擴增蛋白或其含有polyQ部分的片段的親和反應平衡解離常數，選擇所述親和反應平衡解離常數為100μM以下的化合物，優選10μM以下，特別優選1μM以下；和/或

步驟(B)包括：測定候選化合物與(2)LC3B蛋白或其同源物或它們的片段的親和反應平衡解離常數，選擇所述親和反應平衡解離常數為100μM以下的化合物，優選10μM以下，特別優選1μM以下。