[發明專利]一種外泌體組合物、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201910997072.0
• 申請日: 2019-10-20
• 公開（公告）號: CN110559254A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 張新梅
• 申請（專利權）人: 張新梅
• 主分類號: A61K8/99
• 分類號: A61K8/99;A61Q19/00;A61Q7/00;C12N5/0775
• 代理公司: 11429 北京中濟緯天專利代理有限公司
• 代理人: 周倩羽

本發明提供一種外泌體組合物、其制備方法、以及在護膚或生發類皮膚美容產品中的應用，所述外泌體組合物包括外泌體和藥學上可接受的載體，外泌體為單層細胞外泌體、細胞球外泌體、或二者的組合。本發明能夠有效將外泌體輸送至皮膚真皮層，并保持其生物活性，更有效地調節皮膚和毛囊分泌生長因子和基質的能力，最大程度地實現改善肌膚和毛囊問題，達到更為持久的效果，并且最大程度地減少了皮膚組織的損傷，更為安全。

技術領域

本發明涉及醫療美容領域，具體涉及一種外泌體組合物、其制備方法及應用。

背景技術

外泌體是細胞主動分泌的囊泡，含有與細胞來源相關的微小RNA以及蛋白等物質，可進入受體細胞內，參與細胞間的信息交流以及需要重要的生理和病理過程，具有與其來源細胞相似的功能。外泌體直徑為100納米左右，且為磷脂雙分子層結構，極易與表皮細胞融合，進而通過微小RNA等生物活性物質調節細胞的活性。

為了收集足夠的外泌體，需要進行細胞擴大培養。但是，隨著細胞傳代次數的增加，會出現細胞衰老和生長緩慢的狀態，細胞分泌的外泌體也隨之發生變化，例如其中的蛋白質和微小RNA成分，導致其生物活性大大降低。

如何培養及獲取高活性的外泌體，并利用其特殊的生物活性進而轉化為安全、有效的產品，成為亟待解決的問題。

發明內容

本發明創造性地提出一種外泌體組合物、其制備方法、以及在護膚或生發類皮膚美容產品中的應用，并經大量實驗數據證實了該方法和產品效果的可靠性。下文將對本發明內容進行詳細描述。

根據本發明的一方面，提供一種外泌體組合物，其包括外泌體和藥學上可接受的載體。其中，所述外泌體為單層細胞外泌體、細胞球外泌體、或二者的組合。所述單層細胞外泌體或細胞球外泌體來自成纖維細胞，毛囊乳突細胞，脂肪干細胞，胚胎干細胞，造血干細胞，臍帶血干細胞，以及皮膚、脂肪、骨髓來源的間充質干細胞中的一者或多者。

在一些實施方式中，單層細胞外泌體通過以下方式獲得：將成纖維細胞、毛囊乳突細胞、脂肪干細胞、胚胎干細胞、造血干細胞、臍帶血干細胞、或者皮膚、脂肪、骨髓來源的間充質干細胞進行低代數細胞的貼壁擴大培養，至細胞融合率達90％以上后，收集單層細胞外泌體。

在一些實施方式中，細胞球外泌體通過以下方式獲得：將經多次傳代后呈現衰老表型的成纖維細胞、毛囊乳突細胞、脂肪干細胞、胚胎干細胞、造血干細胞、臍帶血干細胞、或者皮膚、脂肪、骨髓來源的間充質干細胞傳代至超低吸附培養瓶中，培養成細胞球，收集細胞球外泌體。

在一些實施方式中，通過以下方法收集單層細胞外泌體或細胞球外泌體：將單層細胞或細胞球置于無血清的培養基中培養，收集上清液并除去細胞及其他雜質，得到單層細胞外泌體或細胞球外泌體。

在一些實施方式中，所述單層細胞外泌體或細胞球外泌體中均表達外泌體標志蛋白CD63，CD81和CD9。

根據本發明的另一方面，還提供一種外泌體的制備方法，包括以下步驟：

將成纖維細胞、毛囊乳突細胞、脂肪干細胞、胚胎干細胞、造血干細胞、臍帶血干細胞、或者皮膚、脂肪、骨髓來源的間充質干細胞進行低代數細胞的貼壁擴大培養，至細胞融合率達90％以上后，通過以下方法收集單層細胞外泌體：將細胞置于無血清的培養基中培養，收集上清液并除去細胞及其他雜質，得到單層細胞外泌體。

根據本發明的另一方面，還提供一種外泌體的制備方法，包括以下步驟：

將經多次傳代后呈現衰老表型的成纖維細胞、毛囊乳突細胞、脂肪干細胞、胚胎干細胞、造血干細胞、臍帶血干細胞、或者皮膚、脂肪、骨髓來源的間充質干細胞傳代至超低吸附培養瓶中，培養成細胞球，通過以下方法收集細胞球外泌體：將細胞球置于無血清的培養基中培養，收集上清液并除去細胞及其他雜質，得到細胞球外泌體。