[發(fā)明專(zhuān)利]諾如病毒的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910995901.1
• 申請(qǐng)日: 2019-10-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111254217A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 小林慎一郎;四方正光;二宮健二;高岡直子
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 株式會(huì)社島津制作所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種諾如病毒的檢測(cè)方法，將待檢體處理液和一步法RT-PCR反應(yīng)液的混合液與待檢體混合，通過(guò)RT-PCR反應(yīng)來(lái)檢測(cè)待檢體中的諾如病毒，所述混合液還包含二甲基亞砜(DMSO)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述諾如病毒基因型為基因組I(GI)或基因組II(GII)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述待檢體源自選自由生物試樣、生物來(lái)源試樣、環(huán)境試樣和環(huán)境來(lái)源試樣組成的組中的試樣。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述待檢體源自選自由排泄物試樣、排泄物來(lái)源試樣、嘔吐物和嘔吐物來(lái)源試樣組成的組中的試樣。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述待檢體為將權(quán)利要求4所述的試樣懸浮于水、生理鹽水或緩沖液中而得到的懸浮液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述待檢體為對(duì)權(quán)利要求5所述的懸浮液進(jìn)行離心分離而得到的離心上清。

7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述待檢體處理液為利用了探針?lè)ǖ闹Z如病毒檢測(cè)試劑盒所包含的樣品處理試劑(Sample Treatment Reagent)，所述一步法RT-PCR反應(yīng)液為所述試劑盒所包含的NoV試劑(NoV Reagent)A、B和C的混合物、是包含逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶的反應(yīng)液，所述試劑盒為島津制作所的產(chǎn)品編號(hào)241-09325系列試劑盒。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述待檢體處理液與所述一步法RT-PCR反應(yīng)液的混合比以體積比計(jì)為3：4～6。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述待檢體處理液與所述一步法RT-PCR反應(yīng)液的混合液中以1～5％(v/v)的濃度包含所述DMSO。

10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述待檢體與還包含DMSO的前述混合液的混合比以體積比計(jì)為1：20～30。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述逆轉(zhuǎn)錄酶選自由AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、HIV逆轉(zhuǎn)錄酶以及它們的突變體組成的組。

12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述DNA聚合酶選自由Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶、KOD DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶以及它們的突變體組成的組。

13.根據(jù)權(quán)利要求1～12中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述RT-PCR反應(yīng)通過(guò)實(shí)時(shí)測(cè)定而監(jiān)測(cè)。

14.根據(jù)權(quán)利要求13中的任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述實(shí)時(shí)測(cè)定通過(guò)使用熒光濾光片測(cè)定RT-PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增曲線(xiàn)，給出判定待檢體中的諾如病毒的存在為陽(yáng)性、或?yàn)殛幮缘慕Y(jié)果。

15.一種諾如病毒的檢測(cè)試劑盒，其是如下構(gòu)成的：

其包含：待檢體處理液、以及含有逆轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶的一步法RT-PCR反應(yīng)液，所述待檢體處理液與所述一步法RT-PCR反應(yīng)液的混合液中含有1～5％(v/v)的DMSO。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒，其判定諾如病毒基因型為基因組I(GI)或?yàn)榛蚪MII(GII)。

17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的試劑盒，其還包含試劑盒的操作步驟說(shuō)明書(shū)。