[發(fā)明專(zhuān)利]造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置及集落計(jì)數(shù)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910993559.1
• 申請(qǐng)日: 2019-10-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110684657A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙新新;張怡;劉艷青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天晴干細(xì)胞股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12M3/00
• 分類(lèi)號(hào): C12M3/00;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 23109 哈爾濱市松花江專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 高倩

本發(fā)明的一種造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置及集落計(jì)數(shù)方法涉及造血干細(xì)胞集落檢測(cè)領(lǐng)域，目的是為了克服現(xiàn)有細(xì)胞集落計(jì)數(shù)中人工計(jì)數(shù)不準(zhǔn)的問(wèn)題，其中造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置包括殼體、位于殼體內(nèi)的控制單元、平移單元和顯微鏡單元；殼體密封、且殼體上壁透明，殼體上壁的上方用于放置多孔細(xì)胞培養(yǎng)板；平移單元設(shè)置于殼體內(nèi)；顯微鏡單元的鏡頭朝向殼體上壁；控制單元分別用于控制平移單元帶動(dòng)顯微鏡單元移動(dòng)、用于以設(shè)定頻率控制顯微鏡單元拍攝樣本圖像、以及用于分析圖像得到樣本中的干細(xì)胞集落類(lèi)型和干細(xì)胞集落數(shù)量。本發(fā)明可以準(zhǔn)確把握集落生長(zhǎng)的過(guò)程，提高了計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，同時(shí)減小了人為誤差。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及造血干細(xì)胞集落檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種利用連續(xù)拍照?qǐng)D片進(jìn)行造血干細(xì)胞集落的計(jì)數(shù)方法。

背景技術(shù)

造血干細(xì)胞是人體內(nèi)存在于造血組織中的一群原始造血細(xì)胞，是所有血細(xì)胞的原始細(xì)胞。由造血干細(xì)胞定向分化、增殖為不同的血細(xì)胞系，并進(jìn)一步生成血細(xì)胞。不管是臍帶血或胎盤(pán)血的儲(chǔ)存還是骨髓移植治療，都需要對(duì)分離后的樣本中的造血干細(xì)胞性能進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的方式包括流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)和集落檢測(cè)。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)目的是對(duì)細(xì)胞表面特征性造血干細(xì)胞抗原CD34進(jìn)行分析鑒定，確定其是否屬于造血干細(xì)胞以及含量、組成，，無(wú)法確定其是否具備增殖分化的能力，集落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)則是鑒定造血干細(xì)胞是否具有分化能力的主要方法。

但在集落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，造血干細(xì)胞經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后增殖分化形成的集落形態(tài)各異，千差萬(wàn)別。檢測(cè)人員通過(guò)顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)，因每個(gè)人的判斷標(biāo)準(zhǔn)、計(jì)數(shù)方法的差異，或集落生長(zhǎng)密集，無(wú)法有效區(qū)分，導(dǎo)致不同檢測(cè)人員所檢測(cè)的集落數(shù)量差異較大，數(shù)據(jù)重復(fù)性較差，真實(shí)性不高，對(duì)樣本后期的治療與應(yīng)用產(chǎn)生不利影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有細(xì)胞集落計(jì)數(shù)中人工計(jì)數(shù)不準(zhǔn)的問(wèn)題，提供了一種造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置。

本發(fā)明的一種造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置，包括殼體和位于殼體內(nèi)的控制單元，還包括平移單元和顯微鏡單元；

殼體密封、且殼體上壁透明，殼體上壁的上方用于放置多孔細(xì)胞培養(yǎng)板；

平移單元設(shè)置于殼體內(nèi)，并且平移單元能夠帶動(dòng)顯微鏡單元在平行于殼體上壁的平面上運(yùn)動(dòng)；

顯微鏡單元的鏡頭朝向殼體上壁，顯微鏡單元能夠透過(guò)殼體上壁觀察并拍攝多孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的樣本；

控制單元分別用于控制平移單元帶動(dòng)顯微鏡單元移動(dòng)、用于以設(shè)定頻率控制顯微鏡單元拍攝樣本圖像、以及用于分析圖像得到樣本中的干細(xì)胞集落類(lèi)型和干細(xì)胞集落數(shù)量。

基于上述造血干細(xì)胞集落自動(dòng)計(jì)數(shù)裝置的集落計(jì)數(shù)方法，步驟如下：

步驟一、按照多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)培養(yǎng)孔位置，通過(guò)平移單元移動(dòng)顯微鏡單元對(duì)任意一個(gè)培養(yǎng)孔內(nèi)的樣本進(jìn)行觀察；

步驟二、在培養(yǎng)周期內(nèi)，通過(guò)控制單元控制顯微鏡單元以一定時(shí)間間隔拍攝任意一個(gè)培養(yǎng)孔內(nèi)樣本培養(yǎng)狀況，得到連續(xù)的樣本培養(yǎng)參照?qǐng)D片；

步驟三、通過(guò)連續(xù)的樣本培養(yǎng)參照?qǐng)D片記錄樣本中干細(xì)胞集落連續(xù)生長(zhǎng)狀態(tài)，并跟蹤干細(xì)胞集落分裂分化狀態(tài)及多簇的形成，進(jìn)而確定所述干細(xì)胞集落生長(zhǎng)范圍和完整邊緣；

步驟四、根據(jù)干細(xì)胞集落生長(zhǎng)范圍和完整邊緣區(qū)分各個(gè)干細(xì)胞集落，并識(shí)別干細(xì)胞集落數(shù)量。

本發(fā)明的有益效果是：

1、可以在二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)直接進(jìn)行，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境不會(huì)造成波動(dòng)，能準(zhǔn)確反映細(xì)胞培養(yǎng)特性；

2、動(dòng)態(tài)獲得結(jié)果，可以準(zhǔn)確把握集落生長(zhǎng)的過(guò)程，對(duì)即使是集落數(shù)目相同但動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)不同的樣本，也可以準(zhǔn)確反映樣本之間的區(qū)別；

3、采用機(jī)器準(zhǔn)確定位和圖像識(shí)別，提高了計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，同時(shí)減小了人為誤差。

附圖說(shuō)明