[發明專利]犬支原體培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 201910990469.7
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110628682A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 陳永鑫;黃明水
• 申請（專利權）人: 陳永鑫
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種新型高效的犬支原體培養基QG5，該培養基是在支原體常規培養基FM?4的基礎上加入了犬血清、如SEQ ID：2序列所示的多肽T5、L?天冬酰胺和NaCl。犬支原體在QG5培養基中能夠實現迅速生長增殖，并且達到很高的活菌滴度,這有助于犬支原體的快速檢測和診斷，有助于犬支原體的快速分離和解析，有助于犬支原體疫苗和治療藥物的開發，有助于犬支原體病機理機制研究。

技術領域

本發明涉及微生物領域，具體涉及犬支原體培養基及其應用。

背景技術

支原體是目前已知能營獨立生活、體積最小、構造最簡單的原核微生物，其無細胞壁、無鞭毛、不運動，革蘭氏染色陰性，但不易著色，在吉姆薩染色片中表現多形態球狀體。多種支原體可以感染犬類，犬支原體主要引起犬呼吸道疾病、泌尿生殖道疾病、貧血癥、關節炎及結腸炎等，如犬類易感嗜血支原體導致出現持續性發熱、流涕、食欲不振，嚴重時會出現嘔吐、腹瀉等急性臨床癥狀，并產生嚴重貧血或溶血性貧血，最終便血而亡。因此支原體是目前危害犬類健康和生命的重要疾病感染源之一，給養殖戶和養殖場造成嚴重的經濟損失，也會給伺養或豢養者造成潛在的感染風險。犬支原體病常伴隨支原體與大腸桿菌、病毒等的混合感染，病情更加兇猛。

對于犬支原體病，分離培養是診斷支原體感染的金標準。除診斷外，支原體的分離培養有助于對支原體進行分型和生理生化研究、解析致病機制、開發疫苗和治療藥物等。然而由于犬支原體對外界環境十分敏感，對培養基的營養要求十分高，生長異常緩慢，分離難度很大，常規的支原體培養基對犬支原體分離和培養效果很差，導致其基礎研究以及臨床疫苗和藥物研發等進展緩慢，因此亟需開發適合于犬支原體快速有效培養的培養基。申請人前期在研究鴿支原體和大腸桿菌混合感染的病鴿時，利用凝膠阻滯實驗和質譜分析從相應體系中分離得到了8種支原體基因組DNA的結合多肽，其中2種能夠很好促進鴿支原體的高效生長增殖。更進一步的，選擇常見的家禽和家畜的典型支原體做其基因組DNA和這8種多肽的結合分析實驗，發現其中2種可以和犬支原體基因組DNA結合，在此基礎上結合常規支原體培養基研發得到了適合于犬支原體快速有效培養的培養基。

發明內容

本發明的目的在于提供適合于犬支原體快速有效培養的培養基及其配制方法和應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案如下：

本發明提供了兩種適合于犬支原體快速有效培養的培養基，分別是QG2和QG5培養基，均各自包括液體培養基和固體培養基。

QG2液體培養基的配方為：FM-4基礎培養液 60%-64%，酵母浸出液（30%） 10%-12%，小牛血清 5%-8%，犬血清 1.0%-2.0%，多肽T2 （4ng/ml） 1.0%-1.5%，L-天冬酰胺 （1g/ml）0.02%-0.05%，NaCl （5g/ml） 0.12%-0.16%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚紅（1%）0.003%，pH值調至7.6-7.8。優選地，最佳的QG2液體培養基配方為：FM-4基礎培養液 62%，酵母浸出液（30%） 10%，小牛血清 6%，犬血清 1.5%，多肽T2 （4ng/ml） 1.2%，L-天冬酰胺（1g/ml） 0.04%，NaCl （5g/ml） 0.13%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚紅（1%） 0.003%，pH值調至7.6-7.8。