[發(fā)明專利]犬支原體培養(yǎng)基及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910990469.7
• 申請(qǐng)日: 2019-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN110628682A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳永鑫;黃明水
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陳永鑫
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種犬支原體液體培養(yǎng)基QG5，其特征在于QG5液體培養(yǎng)基的配方為：FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液 60%-64%，酵母浸出液（30%） 10%-12%，小牛血清 5%-8%，犬血清 1.5%-2.5%，多肽T5（5ng/ml） 1.5%-2.0%，L-天冬酰胺 （1g/ml） 0.02%-0.05%，NaCl （5g/ml） 0.12%-0.16%，青霉素（1×10⁵IU/ml） 1.2%，酚紅（1%） 0.003%，pH值調(diào)至7.6-7.8；配方中各液體組分的百分比添加量均是指體積體積分?jǐn)?shù), 30%酵母浸出液和1%的酚紅中的百分比均是指質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)；添加的FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液事先已經(jīng)高壓滅菌過了，而30%的酵母浸出液、小牛血清、犬血清、5ng/ml的多肽T5、1g/ml的L-天冬酰胺、5g/ml的NaCl、1×10⁵IU/ml的青霉素和1%的酚紅配制后均采用0.22 μm濾膜過濾除菌；多肽T5序列如SEQ ID NO：2所示，可委托生物公司合成，純度不低于95%。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的犬支原體液體培養(yǎng)基QG5，其特征在于最佳的QG5液體培養(yǎng)基配方為：FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液 62%，酵母浸出液（30%） 10%，小牛血清 7%，犬血清 2.0%，多肽T5（5ng/ml） 1.6%，L-天冬酰胺 （1g/ml） 0.04%，NaCl （5g/ml） 0.13%，青霉素（1×10⁵IU/ml）1.2%，酚紅（1%） 0.003%，pH值調(diào)至7.6-7.8。

3. 如權(quán)利要求1或2所述的犬支原體液體培養(yǎng)基QG5的制備方法，其特征在于QG5液體培養(yǎng)基制備方法為：（1）先配制FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液，1000ml的FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液的配制方法為：稱取NaCl 5.0g，KCl 0.4g, MgSO4?7H₂O 0.2g，Na₂HPO₄?12H₂O 1.6g，KH₂PO₄ 0.1g，葡萄糖10.0g，水解乳蛋白 5.0g，溶于超純水中，115℃高壓蒸汽滅菌20min后晾至室溫備用，可依據(jù)該配方按比例配制各所需體積的FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液；（2）根據(jù)所需配制的QG5液體培養(yǎng)基體積按配方中的體積體積分?jǐn)?shù)將事先配好并經(jīng)0.22 μm濾膜過濾除菌了的酵母浸出液，小牛血清，犬血清，多肽T5，L-天冬酰胺，NaCl，青霉素和酚紅充分混勻；（3）在無菌條件下，根據(jù)所需配制的QG5液體培養(yǎng)基體積按配方中的體積體積分?jǐn)?shù)取（1）中已經(jīng)高壓滅菌的FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液，加入（2）中經(jīng)過濾除菌的混合液，用滅菌水補(bǔ)齊定容，用滅菌的1mol/L的NaOH將pH值調(diào)至7.6-7.8，充分搖勻并分裝，最后置于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4.如權(quán)利要求1或2所述的犬支原體液體培養(yǎng)基QG5對(duì)應(yīng)的固體培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于QG5固體培養(yǎng)基制備方法為：FM-4基礎(chǔ)培養(yǎng)液加入1.5%質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的瓊脂，115℃高壓蒸汽滅菌20min，調(diào)成QG5液體培養(yǎng)基組份，并用滅菌的1mol/L的NaOH將pH值調(diào)至7.6-7.8，傾倒至平皿制成平板，4℃存放。

5.如權(quán)利要求1或2所述的QG5液體培養(yǎng)基在犬支原體的快速檢測和診斷、犬支原體的快速分離和解析、犬支原體疫苗和治療藥物的開發(fā)以及犬支原體病機(jī)理機(jī)制研究中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求4所述的QG5固體培養(yǎng)基在犬支原體的快速檢測和診斷、犬支原體的快速分離和解析、犬支原體疫苗和治療藥物的開發(fā)以及犬支原體病機(jī)理機(jī)制研究中的應(yīng)用。