[發(fā)明專利]一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910989860.5
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110554081A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘭萬軍;程玉;陳靜山;張桂濤;林如新
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞太力生物工程有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 11582 北京久維律師事務(wù)所
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明公開了一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，包括如下步驟：S1、材料準(zhǔn)備；將實驗所用的各類材料準(zhǔn)備妥當(dāng)，以保證試驗順利進(jìn)行；S2、試劑準(zhǔn)備；實驗所需試劑，待檢樣品與對照品，需及時備好，以供實驗使用；S3、儀器準(zhǔn)備；實驗儀器提前清洗完畢后備好；S4、配制試劑；將實驗無法直接使用的試劑，進(jìn)行人工配制，以供使用，保證實驗的順利進(jìn)行；S5、檢驗方法；主要以電泳作為方法對其檢驗；S6、分析判斷結(jié)果；通過對比對照品分析判斷出結(jié)果；本發(fā)明涵蓋了材料、試劑、儀器的準(zhǔn)備，試劑的合理配制，科學(xué)的檢驗方法，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)姆治雠卸ǎ龅搅藢⒅亟M蛋白進(jìn)行等電聚焦電泳等電點檢測，結(jié)果科學(xué)合理，具有說服力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法。

背景技術(shù)

等電聚焦(Isoelectric focμsing，簡稱IEF)是六十年代中期出現(xiàn)的新技術(shù)。近年來等電聚焦技術(shù)有了新的進(jìn)展，已迅速發(fā)展成為一門成熟的近代生化實驗技術(shù)。由于其分辨力高，重復(fù)性好，樣品容量大，操作簡便迅速，在生物化學(xué)、分子生物學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)研究中得到廣泛的應(yīng)用。

因此，我們在2015年版《中國藥典》三部等電聚焦電泳法第2法基礎(chǔ)上開發(fā)了SΜBS-4的等電聚焦電泳法，為改善該方法的分離度和重復(fù)性，現(xiàn)對原有等電聚焦電泳方法進(jìn)行優(yōu)化和驗證，擬確立一種更穩(wěn)定可靠的分析方法，用于后期重組人紅細(xì)胞生成素(Fc)融合蛋白原液(rhEPO-Fc)等電點的質(zhì)控。

雖然已經(jīng)建立聚丙烯酰胺等電聚焦電泳分析方法對該蛋白進(jìn)行等電點檢測，但該方法的分辨率還有待進(jìn)一步提高，中國藥典2015年版中收錄的“重組人促紅素注射液(CHO細(xì)胞)”等電聚焦檢驗中凝膠配方含有尿素，所以在重組人紅細(xì)胞生成素質(zhì)量控制體系研究中亦比較了等電聚焦配方采用添加尿素和不添加尿素進(jìn)行等電聚焦電泳，結(jié)果添加尿素各條帶分辨率明顯改善，故我們擬采用等電聚焦配方添加尿素，并對該方法進(jìn)行優(yōu)化及驗證，以期建立一種分辨率更好的聚丙烯酰胺等電聚焦電泳(IEF)方法用于SΜBS-4原液等電點的質(zhì)控。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：為了解決重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測的問題，提供一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，包括如下步驟：

S1、材料準(zhǔn)備：將實驗所用的各類材料準(zhǔn)備妥當(dāng)，以保證試驗順利進(jìn)行；

S2、試劑準(zhǔn)備：實驗所需試劑，待檢樣品與對照品，需及時備好，以供實驗使用；

S3、儀器準(zhǔn)備：實驗儀器提前清洗完畢后備好；

S4、配制試劑：將實驗無法直接使用的試劑，進(jìn)行人工配制，以供使用，保證實驗的順利進(jìn)行；

S5、檢驗方法：主要以電泳作為方法對其檢驗；

S6、分析判斷結(jié)果：通過對比對照品分析判斷出結(jié)果；

其中，所述S1材料準(zhǔn)備，其具體步驟如下：

S101、準(zhǔn)備聚丙烯薄膜：即PAG fim(聚丙烯薄膜，GE Healthare)；

S102、手動裁剪電極條：電極條采用手動裁剪，可以按照自己的需要裁剪；

S103、手動裁剪上樣紙：上樣紙需要手動裁剪，來確保上樣的順利進(jìn)行；

S104、手動裁剪干膠膜：手動裁剪干膠膜以備后用。

其中，所述S2試劑準(zhǔn)備，其具體步驟如下：

S201、準(zhǔn)備待檢樣品及對照品：先將待檢樣品與工作對照品準(zhǔn)備好，以備實驗；