[發明專利]一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法

在審

• 申請號: 201910989860.5
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110554081A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 蘭萬軍;程玉;陳靜山;張桂濤;林如新
• 申請（專利權）人: 東莞太力生物工程有限公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 11582 北京久維律師事務所
• 代理人: 邢江峰

1.一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、材料準備：將實驗所用的各類材料準備妥當，以保證試驗順利進行；

S2、試劑準備：實驗所需試劑，待檢樣品與對照品，需及時備好，以供實驗使用；

S3、儀器準備：實驗儀器提前清洗完畢后備好；

S4、配制試劑：將實驗無法直接使用的試劑，進行人工配制，以供使用，保證實驗的順利進行；

S5、檢驗方法：主要以電泳作為方法對其檢驗；

S6、分析判斷結果：通過對比對照品分析判斷出結果。

2.如權利要求1所述的一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，其特征在于：所述S1材料準備，其具體步驟如下：

S101、準備聚丙烯薄膜聚；

S102、手動裁剪電極條：電極條采用手動裁剪，可以按照自己的需要裁剪；

S103、手動裁剪上樣紙：上樣紙需要手動裁剪，來確保上樣的順利進行；

S104、手動裁剪干膠膜：手動裁剪干膠膜以備后用。

3.如權利要求2所述的一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，其特征在于：所述S2試劑準備，其具體步驟如下：

S201、準備待檢樣品及對照品；先將待檢樣品與工作對照品準備好，以備實驗；

S202、準備各類實驗試劑：準備丙烯酰胺；甲叉雙丙烯酰胺；過硫酸氨；三氯乙酸；硫酸銨；85％磷酸；氫氧化鈉；甲醇；無水乙醇；考馬斯亮藍G250；甘油；冰醋酸；疏水硅烷；TEMED；兩性載體Ampholytes(pH3.0～10.0、pH4.0～6.5)；Marker(3-10)；Marker；超純水。

4.如權利要求3所述的一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，其特征在于：所述S3儀器準備，其具體步驟如下：

S301、準備等電聚焦裝置；

S302、準備激光掃描光密度計：Bio-Rad激光掃描光密度計；

S303、準備水平震蕩儀。

5.如權利要求4所述的一種重組蛋白的等電聚焦電泳等電點檢測方法，其特征在于所述S4配制試劑，其具體步驟如下：

S401、配制30％丙烯酰胺溶液：稱取58.2g丙烯酰胺，1.8g甲叉雙丙烯酰胺，用150ml純水溶解，然后定容至200ml，0.22μm膜過濾后置5±3℃避光保存；

S402、配制固定液：三氯乙酸母液：稱取100g的三氯乙酸加100mL的水混合，使用前混勻；20％三氯乙酸：取20mL母液與80mL的水混合；

S403、配制染色液：染色儲備液：稱取125g硫酸銨，用400ml純水溶解，作為溶液1；稱取1.0g考馬斯亮藍G250，加純水20ml攪拌，加入20g磷酸，溶解后與溶液1混合，定容至1000ml，使用前充分搖勻；工作染色液：取60ml染色儲備液，與30ml甲醇混勻，臨用新配；

S404、配制10％APS；取0.1g分裝好的過硫酸氨一支，1ml超純水溶解，現用現配；

S405、配制電極液：正極液：0.5mol/L磷酸溶液，量取57.6mL磷酸溶于500mL水，定容至1000mL，0.22μm膜過濾，常溫保存；負極液：0.2mol/L氫氧化鈉溶液，稱取8g氫氧化鈉，溶于500mL水，定容至1000mL，0.22μm膜過濾，常溫保存；

S406、配制80％甘油：量取甘油160ml，加純水稀釋至200ml，0.45μm膜過濾，常溫保存；

S407、配制脫色液：準備250ml 95％乙醇，80ml冰醋酸，670ml超純水；

S408、配制干膠脫水液：準備無水乙醇200ml，冰醋酸50ml，甘油50ml，100ml超純水混勻，定容至500ml。