[發明專利]一種防治植物線蟲病害的巨大芽孢桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201910986516.0
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110669691B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 咸洪泉;張啟航;楊亞楠;趙洪海;李雅華;梁晨
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P5/00;C12R1/11
• 代理公司: 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙) 11531
• 代理人: 馬金華

1.防治植物線蟲病害的巨大芽孢桿菌，其特征在于：巨大芽孢桿菌(Bacillusmegatherium)BCCX15，其保藏編號是：CGMCC NO.18007；其為菌體桿狀，其長度為3.49um～6.49um、寬度為1.10um～1.50um，呈鏈狀排布；產芽孢、芽孢中生，短柱狀，革蘭氏染色反應陽性；所述巨大芽孢桿菌能利用蔗糖，不能利用乳糖，檸檬酸鹽試驗、淀粉水解試驗、明膠水解、酪氨酸水解、接觸酶試驗反應都為陽性；吲哚試驗、甲基紅試驗和伏普試驗反應都為陰性。

2.一種如權利要求1所述的巨大芽孢桿菌的培養方法，其特征在于，所述培養方法為：利用牛肉膏蛋白胨液體培養基對巨大芽孢桿菌進行接種并培養，其中，培養條件為：培養基的初始pH值為5.5～9.5，巨大芽孢桿菌的接種量1％～9％，培養溫度為23.5℃～41.5℃，培養基的裝瓶量為10％～50％。

3.根據權利要求2所述的巨大芽孢桿菌的培養方法，其特征在于，采用加富牛肉膏蛋白胨液體培養基，BCCX15的最優發酵條件為pH7.5、接種量3％、10％的裝瓶量、24h的培養時間，活菌數達到2.3×10¹⁰CFU/mL。

4.一種如權利要求1所述的巨大芽孢桿菌的菌劑，其特征在于，所述菌劑采用巨大芽孢桿菌BCCX15發酵培養制備得到，菌劑為液體或者固體。

5.一種如權利要求4所述的巨大芽孢桿菌菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)發酵罐發酵培養基用加富牛肉膏蛋白胨液體培養基，裝料系數為50-80％；

(2)按1％～9％的接種量接入培養16～18h的巨大芽孢桿菌種子液，200～300r/min，23.5℃～41.5℃條件下發酵，加入消泡劑控制消泡；

(3)發酵過程中通氣量(V/V·min)1:1～2，控制pH為5.5～9.5，發酵24～72h，得到發酵液；發酵60h活菌數為4.4×10¹⁰CFU/mL～7.8×10¹⁰CFU/mL，芽孢率為85.1％～91.2％；

(4)用無菌水將上述發酵液調整到1×10⁹CFU/mL，即得巨大芽孢桿菌的液體菌劑；將所述液體菌劑按1:1(V:W)加入滅菌的麩皮吸附，35℃～40℃通風干燥后即得巨大芽孢桿菌固體菌劑。

6.如權利要求4所述的巨大芽孢桿菌菌劑在防治植物線蟲病害中的應用。

7.根據權利要求6所述的巨大芽孢桿菌菌劑在防治植物線蟲病害中的應用，其特征在于，所述植物線蟲病害是小麥胞囊線蟲病、花生根結線蟲病、網紋瓜根結線蟲病、番茄根結線蟲病、黃瓜根結線蟲病。

8.根據權利要求7所述的巨大芽孢桿菌菌劑在防治植物線蟲病害中的應用，其特征在于，用于防治網紋瓜根結線蟲病、番茄根結線蟲病、黃瓜根結線蟲病時，于移栽前穴施巨大芽孢桿菌的液體菌劑，施用劑量為60-70mL/穴。

9.根據權利要求7所述的巨大芽孢桿菌菌劑在防治植物線蟲病害中的應用，其特征在于，用于防治小麥胞囊線蟲病、花生根結線蟲病時，混土施用巨大芽孢桿菌的固體菌劑，施用劑量為5kg/667m²～7kg/667m²。