[發(fā)明專利]酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910985705.6 | 申請(qǐng)日： | 2019-10-17 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110563939A | 公開（公告）日： | 2019-12-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 蔣曉曉;廖小鳳;尹韋蔚;高鵬;楊長林;王峰 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C08G65/333 | 分類號(hào)： | C08G65/333;C12P21/00 |
| 代理公司： | 32104 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) | 代理人： | 殷紅梅;涂三民 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 苯丙氨酸 單甲氧基聚乙二醇 寡肽 共聚物 減壓抽濾 制備 琥珀酰亞胺碳酸酯 惰性氣體保護(hù) 二甲基苯胺 反應(yīng)條件 靜置過夜 無水甲醇 氧基聚乙 副反應(yīng) 酶催化 取代度 預(yù)熱的 丙酮 產(chǎn)率 二醇 甲醇 預(yù)冷 沉淀 溶解 檢測 | ||
本發(fā)明涉及一種酶催化制備苯丙氨酸寡肽?單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，它包括以下步驟：在無水甲醇中加入苯丙氨酸寡肽、氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯與N,N?二甲基苯胺在惰性氣體保護(hù)和下反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后，加入預(yù)冷甲醇，減壓抽濾；將濾液先真空干燥再加入預(yù)熱的丙酮直至全部溶解；將所得溶液靜置過夜，減壓抽濾，所得沉淀為苯丙氨酸寡肽?單甲氧基聚乙二醇共聚物。本發(fā)明方法具有反應(yīng)條件溫和、環(huán)境更友好、副反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，通過本發(fā)明的方法制備的苯丙氨酸寡肽?單甲氧基聚乙二醇共聚物的產(chǎn)率為30~45%。通過1HNMR手段檢測苯丙氨酸寡肽?單甲氧基聚乙二醇共聚物的取代度為1.01~1.1。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，本發(fā)明屬于苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的合成方法技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
人工聚肽是以天然氨基酸為單體進(jìn)行聚合反應(yīng)，通過酰胺鍵而形成的聚氨基化合物，性質(zhì)與天然肽、聚氨基酸和蛋白質(zhì)類似。由人工聚肽形成的材料具有良好的生物親和性和可降解性。聚肽或其改性低聚物表現(xiàn)出自組裝、液晶行為等獨(dú)特結(jié)構(gòu)性質(zhì)，具有較強(qiáng)可塑性，在生物、醫(yī)藥和天然高分子材料領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用潛力。寡聚苯丙胺酸經(jīng)聚乙二醇化修飾或者與谷氨酸、賴氨酸等共聚，可制備得到兩親性大分子，用于藥物包埋、基因載體等。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種反應(yīng)條件溫和、環(huán)境友好、副反應(yīng)少而且避免了繁瑣的保護(hù)和去保護(hù)步驟的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法。
按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，所述酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法包括以下步驟：
a1、在10~20 ml無水甲醇中加入苯丙氨酸寡肽、氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯與N,N-二甲基苯胺共2~5g，苯丙氨酸寡肽、氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯與N,N-二甲基苯胺的重量比為1:(1~2):(8~12)，反應(yīng)混合物在惰性氣體保護(hù)和30~50℃下反應(yīng)10~36 h；
b1、反應(yīng)結(jié)束后，加入100-150ml預(yù)冷至-5-0℃的甲醇，減壓抽濾；
c1、將濾液先在30-50℃下真空干燥6-10小時(shí)，再加入預(yù)熱到40-52℃的丙酮直至全部溶解；
d1、將所得溶液在-5-0℃靜置過夜，減壓抽濾，所得沉淀為苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物。
步驟b1中，減壓后的氣壓范圍為0~10Kpa，抽濾的時(shí)間為0.5~1小時(shí)。
步驟d1中，減壓后的氣壓范圍為0~10Kpa，抽濾的時(shí)間為0.5~1小時(shí)。
苯丙氨酸寡肽的合成方法包括以下步驟：
a2、在2.0~3.0 mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中加入0.5~2.0 g 的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽、二甲亞砜和2~5 U蛋白酶，反應(yīng)混合物置于恒溫振蕩器中并在500~700 rpm、30~70℃下反應(yīng)5~10小時(shí)；其中，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中含有0.1~0.2M的磷酸氫二鈉-檸檬酸，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的pH值為6.5~8.5，二甲亞砜的體積為磷酸緩沖液體積的20%~50%；
b2、反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物在8000~12000rpm下離心2~4分鐘，得到沉淀；
c2、沉淀用去離子水和冰乙醇各洗2~3次，冷凍干燥后得到苯丙氨酸寡肽。
步驟a2中，所述蛋白酶為菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種。
甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯的制備采用如下步驟：
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