[發明專利]酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法

在審

• 申請號: 201910985705.6
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110563939A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 蔣曉曉;廖小鳳;尹韋蔚;高鵬;楊長林;王峰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C08G65/333
• 分類號: C08G65/333;C12P21/00
• 代理公司: 32104 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙)
• 代理人: 殷紅梅;涂三民

1.一種酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是該方法包括以下步驟：

a₁、在10~20 ml無水甲醇中加入苯丙氨酸寡肽、氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯與N,N-二甲基苯胺共2~5g，苯丙氨酸寡肽、氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯與N,N-二甲基苯胺的重量比為1:(1~2):(8~12)，反應混合物在惰性氣體保護和30~50℃下反應10~36 h；

b₁、反應結束后，加入100ml-150ml預冷至-5-0℃的甲醇，減壓抽濾；

c₁、將濾液先在30-50℃下真空干燥6-10小時，再加入預熱到40-52℃的丙酮直至全部溶解；

d₁、將所得溶液在-5-0℃靜置過夜，減壓抽濾，所得沉淀為苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物。

2.如權利要求1所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟b₁中，減壓后的氣壓范圍為0~10Kpa，抽濾的時間為0.5~1小時。

3.如權利要求1所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟d₁中，減壓后的氣壓范圍為0~10Kpa，抽濾的時間為0.5~1小時。

4.如權利要求1所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是苯丙氨酸寡肽的合成方法包括以下步驟：

a₂、在2.0~3.0 mL磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中加入0.5~2.0 g 的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽、二甲亞砜和2~5 U蛋白酶，反應混合物置于恒溫振蕩器中并在500~700 rpm、30~70℃下反應5~10小時；其中，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中含有0.1~0.2M的磷酸氫二鈉-檸檬酸，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的pH值為6.5~8.5，二甲亞砜的體積為磷酸緩沖液體積的20%~50%；

b₂、反應結束后，將反應混合物在8000~12000rpm下離心2~4分鐘，得到沉淀；

c₂、沉淀用去離子水和冰乙醇各洗2~3次，冷凍干燥后得到苯丙氨酸寡肽。

5.如權利要求4所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟a₂中，所述蛋白酶為菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種。

6.如權利要求1所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯的制備采用如下步驟：

a₃、在25 mL無水四氫呋喃中，加入1~2 g甲氧基聚乙二醇、5~8 g的N,N'-二琥珀酰亞胺基碳酸酯和3~6 g的4-(二甲基氨基)吡啶，在150~250rpm的速度攪拌下條件下，將反應混合物于25~35℃下反應4~8小時；

b₃、反應結束后，將反應混合物在35~45℃下真空蒸餾除去無水四氫呋喃；

c₃、將反應混合物倒入預冷無水乙醚中，減壓抽濾收集沉淀，所得沉淀為甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺碳酸酯。

7. 如權利要求6所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟a₃中，甲氧基聚乙二醇的平均分子量為200 Da、400 Da或者1000 Da。

8.如權利要求6所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟b₃中，真空蒸餾時的真空度控制在0~10Kpa。

9.如權利要求6所述的酶催化制備苯丙氨酸寡肽-單甲氧基聚乙二醇共聚物的方法，其特征是：步驟c₃中，無水乙醚的預冷溫度為-5-0℃，減壓抽濾的氣壓控制在0~10Kpa。