[發明專利]一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法

在審

• 申請號: 201910985093.0
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110618214A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 劉萍
• 申請（專利權）人: 臺州科技職業學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/86
• 代理公司: 33229 臺州藍天知識產權代理有限公司
• 代理人: 王衛兵

本發明公開了一種液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法。該方法采用高效液相色譜?串聯質譜對液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸進行測定和確證；通過換算系數和已測定的β?羥基?β?甲基丁酸含量，換算得到液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸鈣鹽的含量。該方法包括液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸測定的樣品前處理步驟，空白試驗方法，高效液相色譜?串聯質譜的測定和確證步驟，以及液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸鈣鹽的換算方法。本發明提供的液體飲料中β?羥基?β?甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法，具有色譜保留和線性關系好、樣品前處理較簡單、回收率和準確度高等優點，可廣泛應用于液體飲料樣品中β?羥基?β?甲基丁酸及其鈣鹽成分的定量檢測和摻假判別。

技術領域

本發明涉及食品和保健品質量分析領域，尤其涉及一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法。

背景技術

β-羥基-β-甲基丁酸(CAS:625-08-1)是必需氨基酸亮氨酸在體內通過其代謝產物α-酮異己酸產生的一種衍生物。必需氨基酸亮氨酸無法在人體內自行合成，一般通過飲食從外界攝取，人體內的亮氨酸除了被用于蛋白合成外，少量的亮氨酸經代謝后能產生少量的β-羥基-β-甲基丁酸，在正常飲食條件下，成年人體一般每天能產生約200～400mgβ-羥基-β-甲基丁酸。由于β-羥基-β-甲基丁酸對人體具有增加肌肉合成，減少肌肉分解，減少脂肪，增長瘦體重，改善肌肉質量、肌肉力量和軀體功能的作用，并可以用于肌少癥的營養干預，近年來備受眾多醫學專家和營養專家的關注，以及健身職業運動員的青睞。

在商業化生產中，為了便于儲存和使用，合成時通常將β-羥基-β-甲基丁酸轉化成β-羥基-β-甲基丁酸鈣鹽的形式，β-羥基-β-甲基丁酸鈣為粉末狀物質，溶于水，并且穩定性較好。原衛生部2011年1號公告批準β-羥基-β-甲基丁酸鈣作為新資源食品，使用范圍為運動營養食品、特殊醫學用途配方食品；2017年5月國家衛生計生委發布公告，由于β-羥基-β-甲基丁酸鈣的安全性評估材料審查并通過，故擴大β-羥基-β-甲基丁酸鈣的使用范圍到液體飲料類、乳及乳制品、可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果、烘焙食品。隨著使用范圍的大幅擴增，β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽在包括液體飲料在內的多種產品中，將具有十分廣闊的應用前景。

當前，國內外有關食品中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的檢測，未見液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽含量的檢測方法，但已有液相色譜紫外法(HPLC-UV)檢測大豆肽蛋白質粉中β-羥基-β-甲基丁酸的含量的報道。由于單純的HPLC-UV檢測法是一種非確證檢測方法，無法對目標化合物進行定性確證，進而影響樣品檢測結果是否含有β-羥基-β-甲基丁酸的確證判斷。本發明旨在建立一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的高效液相色譜-串聯質譜(HPLC-MS/MS)測定和確證方法，考慮到已有的大豆肽蛋白質粉樣品檢測所用的HPLC-UV法中的磷酸鹽流動相體系和質譜不兼容，以及液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽含量的檢測未見報道的現狀，本發明通過優化色譜柱類型、與質譜兼容的流動相，以及樣品前處理方法等，建立一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的高效液相色譜-串聯質譜(HPLC-MS/MS)測定和確證方法。所建立的方法在靈敏度、抗干擾能力以及目標化合物的確證方面具有明顯的優勢，并且具有色譜保留和線性關系好、樣品前處理較簡單、回收率和準確度高等優點，可廣泛應用于液體飲料樣品中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽成分的定量檢測和摻假判別。

發明內容

為了解決液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽無對應的測定和確證方法的難題，本發明的目的是提供一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法，該方法具有色譜保留和線性關系好、樣品前處理較簡單、回收率和準確度高，能定性確證等優點。

為了實現上述目的，本發明提供一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測定和確證方法，包括以下步驟：

(1)對不含和含二氧化碳液體飲料樣品的前處理；