[發(fā)明專利]一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測(cè)定和確證方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910985093.0
• 申請(qǐng)日: 2019-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN110618214A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 臺(tái)州科技職業(yè)學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/86
• 代理公司: 33229 臺(tái)州藍(lán)天知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王衛(wèi)兵

1.一種液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸及其鈣鹽的測(cè)定和確證方法，其特征在于該檢測(cè)方法包括以下的步驟：

(1)對(duì)不含和含二氧化碳液體飲料樣品的前處理；

(2)空白試驗(yàn)：除未添加液體飲料樣品外，其他均按照步驟(1)方法處理后得到的樣品；

(3)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)測(cè)定和確證β-羥基-β-甲基丁酸；

(4)液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸鈣鹽含量的換算。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，不含二氧化碳液體飲料樣品的前處理步驟為：稱取1～5g均勻試樣至50mL容量瓶中，添加約25mL 0.1％甲酸甲醇溶液混勻后，超聲提取10min，冷卻至室溫后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混勻。將容量瓶中適量液體轉(zhuǎn)移至塑料離心管中，以≥10 000rpm的速度離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。如上清液中的β-羥基-β-甲基丁酸濃度過大，并超校準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)按照逐級(jí)稀釋的原則，將上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，含二氧化碳液體飲料樣品的前處理步驟為：轉(zhuǎn)移適量液體試樣至燒杯中，置于超聲波清洗器中超聲，直至燒杯中液體試樣無氣泡冒出，取出燒杯冷卻至室溫。稱取1～5g均勻試樣至50mL容量瓶中，添加約25mL0.1％甲酸甲醇溶液混勻后，超聲提取10min，冷卻至室溫后用0.1％甲酸甲醇溶液定容至刻度混勻。將容量瓶中適量液體轉(zhuǎn)移至塑料離心管中，以≥10 000rpm的速度離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。如上清液中的β-羥基-β-甲基丁酸濃度過大，并超校準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)按照逐級(jí)稀釋的原則，將上清液用0.1％甲酸甲醇溶液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)測(cè)定β-羥基-β-甲基丁酸的條件如下：

色譜柱：極性端基封尾的C18固定相色譜柱(Synergy Hydro-RP色譜柱，250×4.6mm，4μm)或相當(dāng)者；

梯度洗脫：流動(dòng)相A為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫條件設(shè)定為：0～15.0min，10～50％B；15.0～15.1min，50～10％B；15.1～20min，10％B；

柱溫箱溫度：30℃；

進(jìn)樣量：10μL；

流速：0.8mL/min；

電噴霧離子源工作模式：負(fù)離子；

數(shù)據(jù)采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式；

MRM的特征母離子/子離子對(duì)：117.0/59.0和117.0/41.0；

簾氣：40.0L/min；

碰撞氣：中等(Medium)；

電噴霧離子源電壓：-4500V；

溫度(TEM)：550℃；

離子源氣體1：70.0psi；

離子源氣體2：70.0psi；

入口電壓：-10.0V；

碰撞室出口電壓：-13.0V；

測(cè)量方式：校準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)確證β-羥基-β-甲基丁酸的方法如下：按照高效液相色譜-質(zhì)譜條件對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液進(jìn)行測(cè)定。如果樣液中的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致，樣液中目標(biāo)化合物所選擇的離子均出現(xiàn)，而且選擇的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的豐度比在允許偏差范圍內(nèi)，則可判斷樣液中存在β-羥基-β-甲基丁酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸鈣鹽含量的換算方法如下：根據(jù)液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸的測(cè)定結(jié)果，將試樣中測(cè)得的β-羥基-β-甲基丁酸含量乘以對(duì)應(yīng)的換算系數(shù)，可換算得到液體飲料中β-羥基-β-甲基丁酸鈣鹽或水合β-羥基-β-甲基丁酸鈣鹽的含量。