[發(fā)明專利]一種冷凍電鏡樣品制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910984577.3
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110823931B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 章新政;吳春玲;石會剛
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院生物物理研究所
• 主分類號: G01N23/20008
• 分類號: G01N23/20008;G01N1/42;G01N23/20;G01N23/04
• 代理公司: 北京中強智尚知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11448
• 代理人: 黃耀威

1.一種冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

預(yù)先設(shè)置凍樣裝置的濕度、溫度和吸水時間并更換干燥濾紙；

向凍樣裝置內(nèi)加入液氮預(yù)冷使后續(xù)加入到凍樣裝置內(nèi)的氣態(tài)乙烷或/和丙烷液化為-160℃～-40℃液態(tài)乙烷或/和丙烷；

用鑷子夾取預(yù)處理的冷凍載網(wǎng)，將鑷子固定在凍樣裝置的凍樣桿上，在冷凍載網(wǎng)上添加含水樣品使含水樣品在冷凍載網(wǎng)上形成超薄液膜；

通過提高所述液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，使液膜中的水在-160℃～-40℃條件時在冷凍載網(wǎng)上形成高溫玻璃態(tài)水，將樣品包埋在玻璃態(tài)水中；

把包埋樣品的冷凍載網(wǎng)放入液氮中保存待用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述通過提高液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，是把形成水膜的冷凍載網(wǎng)插入以1～50m/s的速度流動的所述液態(tài)乙烷或/和丙烷中進行冷凍。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述通過提高液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，是使所述凍樣桿以1～50m/s速度豎直下落、并在所述液態(tài)乙烷或/和丙烷中下落0.5～50cm的距離進行冷凍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述通過提高液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，是將所述凍樣桿一端固定，連有鑷子的另一端水平釋放，使凍樣桿靠自身重力或/和通過機械彈簧在凍樣桿的固定端、或中間位置、或樣品端豎直施加外力，實現(xiàn)凍樣桿從水平位置開始在豎直平面內(nèi)帶動冷凍載網(wǎng)沿凍樣桿的固定端做高速的圓周運動，使冷凍載網(wǎng)劃過所述液態(tài)乙烷或/和丙烷進行冷凍。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一項所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述液態(tài)乙烷或/和丙烷的溫度為-180℃～-160℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述通過提高液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，是對凍樣裝置的制樣室或?qū)λ隼鋬鲚d網(wǎng)施加10～2100bar的壓強對置于所述液態(tài)乙烷或/和丙烷中的冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述通過提高液態(tài)乙烷或/和丙烷與形成液膜的冷凍載網(wǎng)的相對運動速率來提高冷卻速率對冷凍載網(wǎng)上的液膜進行冷凍，是向所述形成液膜的冷凍載網(wǎng)上以10～200m/s的速度噴射所述液態(tài)乙烷或/和丙烷進行冷凍。

8.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的冷凍電鏡樣品制備方法，其特征在于：所述鑷子尖端細長，其尖端長1～10cm，寬0.01～0.5cm。