[發明專利]一種熱休克蛋白Hsp20的基因克隆、制備方法及其應用有效
| 申請號： | 201910984102.4 | 申請日： | 2019-10-16 |
| 公開（公告）號： | CN110627878B | 公開（公告）日： | 2022-04-12 |
| 發明（設計）人： | 張國強;戚一曼;黃玉;孟想 | 申請（專利權）人： | 安徽工程大學 |
| 主分類號： | C07K14/195 | 分類號： | C07K14/195;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 蕪湖思誠知識產權代理有限公司 34138 | 代理人： | 楊濤 |
| 地址： | 241000 安徽省*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 休克 蛋白 hsp20 基因 克隆 制備 方法 及其 應用 | ||
1.一種重組Hsp20蛋白在提高宿主菌環境耐受性中的應用，其特征在于，所述宿主菌通過表達重組Hsp20蛋白提高對氧化沖擊環境的抗性，所述Hsp20蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所述。
2.根據權利要求1所述重組Hsp20蛋白在提高宿主菌環境耐受性中的應用，其特征在于，所述Hsp20的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述。
3.根據權利要求1所述重組Hsp20蛋白在提高宿主菌環境耐受性中的應用，其特征在于，所述Hsp20的基因克隆方法包括如下步驟：
（1）利用基因組DNA提取試劑盒從酒酒球菌中提取出總DNA；
（2）以提取的總DNA為模板，利用設計的克隆引物和表達引物，通過PCR擴增得到Hsp20蛋白基因片段；
所述PCR反應條件：①95℃預變性3 min，②95 ℃變性15 s，③50℃退火30s，④72 ℃延伸30s，⑤重復35個循環，⑥72℃延伸5 min⑦降溫至4℃；
上游引物：5’- CCGGAATTCATGGCAAATGAATTAATGGA-3’
下游引物：5’-CCGCTCGAGTTGGATTTCAATATGATGAGT-3’
（3）將克隆產物利用EcoRI，XhoI酶切后插入質粒載體中構建重組蛋白表達載體。
4.根據權利要求3所述重組Hsp20蛋白在提高宿主菌環境耐受性中的應用，其特征在于：所述重組蛋白表達載體為pTriEx-hsp20質粒。
5.根據權利要求4所述重組Hsp20蛋白在提高宿主菌環境耐受性中的應用，其特征在于：所述宿主菌為大腸桿菌BL21菌株。
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