[發明專利]細胞周期檢測方法及其所用試劑與試劑盒

在審

• 申請號: 201910983428.5
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110760564A
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 李佐青;劉津;陳大為;王勝旺;鄧少華;康愷
• 申請（專利權）人: 菲諾克生物科技(上海)有限公司
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44;C12Q1/02
• 代理公司: 44224 廣州華進聯合專利商標代理有限公司
• 代理人: 何錦輝

1.細胞周期檢測方法，包括：使用濃度為0.06％～0.3％(g/ml)的皂素與細胞接觸增強其細胞膜的通透性，以使得DNA結合染料與核糖核酸酶能夠進入細胞內并發揮活性。

2.根據權利要求1所述的細胞周期檢測方法，所述皂素的濃度為0.08％～0.12％(g/ml)或0.23％～0.27％(g/ml)。

3.根據權利要求1所述的細胞周期檢測方法，將所述皂素、所述DNA結合染料和所述核糖核酸酶與所述細胞共孵育。

4.根據權利要求1所述的細胞周期檢測方法，所述DNA結合染料選自碘化丙啶、7-氨基放線菌素D、Hoechst 33342、Hoechst 33258、Hoechst S769121、TO-PRO-3、4',6-二脒基-2-苯基吲哚、DRAQ5^TM和DRAQ7^TM中的一種或多種；

優選的，所述DNA結合染料為70μg/ml～130μg/ml的碘化丙啶。

5.根據權利要求1所述的細胞周期檢測方法，所述核糖核酸酶選自RNase I、RNaseIII、RNase B、RNase D、RNase H、RNase L、RNase P、RNase PH、RNase PhyM、RNase R、RNaseU2，RNaseN1、RNaseN2、RNase T1、RNase T2、RNase VI、RNase V、寡核糖核酸酶、核糖核酸外切酶I、核糖核酸外切酶II以及重組核糖核酸酶中的一種或多種；

優選的，所述核糖核酸酶為0.7mg/ml～1.3mg/ml的RNase I。

6.根據權利要求1～5任一項所述的細胞周期檢測方法，所述皂素與細胞接觸的時間為5min～15min。

7.根據權利要求1～5任一項所述的細胞周期檢測方法，所述方法中不使用額外的細胞透膜劑和/或細胞固定劑。

8.用于細胞周期檢測的試劑，其組成及工作濃度在以下范圍內：

種類和使用量為權利要求1～7任一項中所定義的皂素、DNA結合染料與核糖核酸酶。

9.根據權利要求8所述的試劑，其特征在于，所述試劑中還包含緩沖組分。

10.試劑盒，其包含權利要求8或9所述的試劑，或包含用于配置所述試劑的各組分。