[發(fā)明專利]基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的方法

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• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110658170A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘭靜;趙京文;徐華;丁瑾;張嫄;彭鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 西安市中心血站
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 61257 西安維賽恩專利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 劉艷霞

本發(fā)明公開了基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的方法，該方法如下：步驟一、建立亞甲藍(lán)檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。步驟二、選取經(jīng)亞甲藍(lán)處理后的病毒滅活血漿，在病毒滅活血漿中另加入亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入的亞甲藍(lán)在所述病毒滅活血漿中的濃度為A，再加入牛血清白蛋白穩(wěn)定的金納米團(tuán)簇，測定此時的病毒滅活血漿的熒光強(qiáng)度為I’，將所述I’代入所述步驟一中的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到所述病毒滅活血漿中總的亞甲藍(lán)的濃度C，由C?A，得到病毒滅活血漿中原有亞甲藍(lán)的濃度。血漿中總的亞甲藍(lán)的濃度C，由C?A，得到病毒滅活血漿中原有亞甲藍(lán)的濃度。該方法步驟少，快速地實(shí)現(xiàn)了病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的檢測。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于血液檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的方法。

【背景技術(shù)】

為了防止輸血感染病毒，臨床用血漿廣泛采用亞甲藍(lán)光照法對血漿病毒進(jìn)行滅活，這是我國唯一獲準(zhǔn)在臨床使用的單人份血液成分病毒滅活技術(shù)。國外研究表明，血漿病毒滴度降低程度與所用的可見光強(qiáng)度和亞甲藍(lán)濃度有直接關(guān)系，但亞甲藍(lán)存在致突變的可能，若殘留量過多，血漿的外觀和色澤改變明顯，不容易被患者接受，因此對病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的濃度進(jìn)行控制具有重要的意義。《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(2012版)》中明確規(guī)定，對病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量≤0.3moL/L。

目前采供血機(jī)構(gòu)用于亞甲藍(lán)殘留量測定的方法為固相萃取-紫外分光光度法，市面上也有相對比較成熟的試劑盒。固相萃取-紫外分光光度法是利用固相小柱對病毒滅活血漿中的亞甲藍(lán)進(jìn)行萃取，然后利用亞甲藍(lán)在653nm處有最大吸收對亞甲藍(lán)殘留量進(jìn)行測定。雖然固相萃取-紫外分光光度法能夠用于病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)殘留量的測定，但其成本較高，操作繁瑣，經(jīng)過萃取-洗滌-洗脫-離心，樣品需要量大，需要6mL。因此在一定程度上浪費(fèi)了血液資源，加大了工作人員的工作強(qiáng)度，進(jìn)而影響了工作效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是提供基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的方法，該方法步驟少，快速地實(shí)現(xiàn)了病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的檢測。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移檢測病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的方法，該方法如下：

步驟一、建立亞甲藍(lán)檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

步驟二、選取經(jīng)亞甲藍(lán)處理后的病毒滅活血漿，在所述病毒滅活血漿中另加入亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入的亞甲藍(lán)在所述病毒滅活血漿中的濃度為A，再加入牛血清白蛋白穩(wěn)定的金納米團(tuán)簇，測定此時的病毒滅活血漿的熒光強(qiáng)度為I^’，將所述I’代入所述步驟一中的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，得到所述病毒滅活血漿中總的亞甲藍(lán)的濃度C，由C-A，得到病毒滅活血漿中原有亞甲藍(lán)的濃度。

進(jìn)一步地，該步驟二中濃度A為10～30μM。

進(jìn)一步地，該步驟一的具體過程如下：將空白溶液和多個濃度c_MB不同的亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入對應(yīng)的牛血清白蛋白穩(wěn)定的金納米團(tuán)簇中，測定熒光強(qiáng)度，空白溶液的熒光強(qiáng)度為I₀，亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度為I，以(I₀-I)/I₀為縱坐標(biāo)，亞甲藍(lán)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為(I₀-I)/I₀＝0.018c_MB+0.021，其中空白溶液為不添加亞甲藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液的純凈水。

本發(fā)明的有益效果是：操作簡單，步驟少，快速地實(shí)現(xiàn)了病毒滅活血漿中亞甲藍(lán)的檢測。

【附圖說明】

圖1為亞甲藍(lán)的紫外吸收光譜與牛血清白穩(wěn)定的金納米熒光光譜組合圖。

圖2為牛血清白蛋白穩(wěn)定的金納米團(tuán)簇中分別加入去離子水和亞甲藍(lán)溶液的熒光光譜圖。

圖3為緩沖溶液的pH變化對亞甲藍(lán)猝滅金納米團(tuán)簇?zé)晒獬潭鹊挠绊憟D。