[發明專利]一種腦脫細胞支架的制備方法

有效

• 申請號: 201910978000.1
• 申請日: 2019-10-15
• 公開（公告）號: CN110694113B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 施煒;劉倩倩;姚俊中
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/50
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

本發明提供一種腦脫細胞支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)采用去污劑浸泡漂洗法獲得腦脫細胞支架作為細胞載體；(2)對步驟(1)腦脫細胞支架的預血管化，得到預血管化的腦脫細胞支架；(3)將PC12細胞移植到步驟(2)所制備的預血管化的支架中，驗證預血管化的腦脫細胞支架中血管網絡的形成，在組織工程中對種子細胞移植的重要性。本發明為腦脫細胞支架作為細胞載體用于中樞神經系統損傷的修復提供了實驗依據，同時初步構建的腦脫細胞支架預血管化的方法為腦脫細胞支架預血管化后攜帶種子細胞移植在創傷性腦損傷后組織、神經再生修復提供了新的治療策略。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種腦脫細胞支架的制備方法。

背景技術

創傷性顱腦損傷(tramatic brain injury，TBI)作為臨床上最常見的中樞神經系統(central nervous system，CNS)疾病，致死率和致殘率極高，總體預后差，給社會和家庭造成了沉重的負擔。經研究發現TBI后繼發性神經損傷主要是以神經細胞凋亡、丟失為主，且神經元不具備再生能力，損傷后自身無法獲得再生^]，因此，細胞替代治療對于TBI后的神經再生修復具有重要的意義，這也一直是國內外TBI治療的研究熱點。然而由于移植微環境的限制和血腦屏障的存在，傳統的通過輸注的方式將種子細胞移植到腦損傷區的效率并不理想。同時，TBI后腦損傷局部可形成缺損空洞或軟化灶，并以膠質疤痕修復為主，進一步阻礙了神經元的再生修復，因此如何使移植的種子細胞更為有效進入腦損傷區、并且存活發揮功能是當前腦損傷后神經再生修復研究所面臨的重大難題。目前較多的研究發現TBI后利用殼聚糖、多肽水凝膠、絲素蛋白等生物材料構建可攜帶干細胞的復合支架可明顯改善大鼠的神經功能恢復。構建與腦損傷區形態匹配的細胞載體支架，可有效輸送種子細胞，為種子細胞的生長提供適宜的空間，并減少膠質增生。然而無論哪一種人工合成的用于神經修復的生物材料都不能代表真正的腦組織，它無法完全“拷貝”出中樞神經系統微環境，不能完全提供正常生理狀態下神經組織對各種神經細胞的支持作用。而當前以“全器官脫細胞及再細胞化方案”為基礎的人工生物器官作為組織工程研究的一部分，已經成為再生醫學研究的熱點，有著巨大的臨床應用前景。相對于傳統的人工生物材料，來源于脫細胞基質的支架是一種良好的天然的組織工程材料：它利用不同的方法除去組織或器官內的細胞成分和可溶性蛋白，僅保留組織結構中的不溶性基質成分，主要為細胞外基質(Extrancecellμlar matrixc，ECM)，其無免疫源性或免疫源性極低。同時，EMC具有“生理狀態下呈三維空間結構，可為攜帶種子細胞、或為新組織的生成提供網狀結構性支架；其包含有膠原、粘多糖、生長因子等可支持種子細胞粘附，存活和增殖，在組織修復和重構中起著重要的促進作用。”目前已有研究將器官特異性的種子細胞選擇性灌注到靶器官的ECM支架中，在體外成功的合成有功能的生物人工心臟、肝臟、肺臟、小腸等器官。

近期有文獻報道，單純移植腦脫細胞后細胞外基質可以明顯改善顱腦外傷后神經功能的恢復；移植攜帶有bFGF的腦脫細胞支架可以明顯增強帕金森大鼠的神經保護作用。同時，小腦組織經漂洗法獲得的脫細胞支架可種植神經干細胞，并誘導神經干細胞向星形膠質細胞、神經元等分化。但由于CNS特殊、復雜的解剖結構及生理功能，目前缺乏理想、可適于臨床運用的大腦脫細胞支架，有關腦脫細胞支架的研究仍處于早期嘗試階段，尚無公認的脫細胞方法，因此，尋找一個制備腦組織脫細胞支架的最佳方案具有極高的研究價值。

發明內容

本發明提供一種腦脫細胞支架的制備方法，以解決背景技術中所提出的問題。

為解決上述技術問題，本發明的實施例提供一種腦脫細胞支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)采用去污劑浸泡漂洗法獲得腦脫細胞支架作為細胞載體；(2)對步驟(1)腦脫細胞支架的預血管化，得到預血管化的腦脫細胞支架。