[發明專利]一種腦脫細胞支架的制備方法

有效

• 申請號: 201910978000.1
• 申請日: 2019-10-15
• 公開（公告）號: CN110694113B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 施煒;劉倩倩;姚俊中
• 申請（專利權）人: 南通大學附屬醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/50
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

1.一種腦脫細胞支架的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）采用去污劑浸泡漂洗法獲得腦脫細胞支架作為細胞載體；（2）對步驟（1）腦脫細胞支架的預血管化，得到預血管化的腦脫細胞支架；具體的，在步驟（2）中，將HUVECs種植到步驟（1）所得到的腦脫細胞支架中，并使其過表達VEGF，將其移植到SD大鼠腹部皮下，經HE、CD31染色證實支架中有血管形成；（3）將PC12細胞移植到步驟（2）所制備的預血管化的支架中，驗證預血管化的腦脫細胞支架中血管網絡的形成，在組織工程中對種子細胞移植的重要性。

2.根據權利要求1所述的一種腦脫細胞支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）具體包括以下過程：取300-400g SD大鼠，復合麻醉劑腹腔麻醉成功后打開胸腹腔，充分暴露心臟后從心尖端進針經左心室插入升主動脈，并用止血鉗固定，隨后剪開右心耳，灌注0.9%氯化鈉注射液約300 mL ，至右心耳流出無色液體后停止灌注，斷頭取出腦組織，去除非中樞神經系統組織后將腦組織放入玻璃皿中，脫色搖床上完成脫細胞：1%TritonX-100+0.1%氨水漂洗，速度：80rpm/min，液體渾濁后更換液體，至脫細胞支架成無色透明為止；PBS漂洗：3次×5min/次；DNA酶處理3次×30min/次；PBS漂洗：3次×5min/次；將脫細胞支架置于4℃PBS中保存備用。

3.根據權利要求1所述的一種腦脫細胞支架的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）具體包括以下過程：將PC12細胞移植到預血管化的支架中，作為實驗組；并以未經步驟（2）預血管化的腦脫細胞支架作為對照組，經PC12細胞在預血管化支架中存活時間與在對照組時間進行比較。