[發(fā)明專利]一種腈苯唑單克隆抗體的制備及其應(yīng)用

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• 申請日: 2019-10-15
• 公開（公告）號(hào): CN110684112A
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何方洋;萬宇平;馮才偉;趙正苗;崔海峰;王兆芹;馬玉華
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/44
• 分類號(hào): C07K16/44;C07D233/56;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/52
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本發(fā)明公開了一種腈苯唑單克隆抗體的制備方法，并將其應(yīng)用于腈苯唑殘留檢測試紙條和酶聯(lián)免疫試劑盒。試紙條包括：樣品吸收墊(1)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3)、吸水墊(4)和底板(7)，所述反應(yīng)膜上具有包被有腈苯唑半抗原?載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線(6)，所述結(jié)合物釋放墊(2)噴涂有腈苯唑單克隆抗體?膠體金標(biāo)記物。試劑盒包括：包被有包被原的酶標(biāo)板、腈苯唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液、腈苯唑抗體、酶結(jié)合物濃縮液、酶結(jié)合物稀釋液、底物顯色液、終止液、洗滌液，所述包被原為腈苯唑偶聯(lián)抗原，所述酶結(jié)合物為酶標(biāo)記的腈苯唑抗體。本發(fā)明所提供的試紙條和酶聯(lián)免疫試劑盒具有操作簡單、靈敏度高、檢測速度快、成本低等特點(diǎn)，適合大量樣本的篩查和現(xiàn)場監(jiān)控。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種腈苯唑單克隆抗體的制備及其應(yīng)用，具體涉及一種腈苯唑單克隆抗體的制備方法，其特別適用于蔬菜、水果等農(nóng)作物中腈苯唑殘留的檢測。

背景技術(shù)

腈苯唑又叫唑菌腈、苯腈唑，是三唑類內(nèi)吸殺菌劑，能阻止已發(fā)芽的病菌孢子侵入作物組織，抑制菌絲的伸長，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果病害，能有效防治果樹的黑星病、腐爛病，以及蔬菜的葉斑病、白粉病、銹病及角斑病等。由于不合理的使用腈苯唑會(huì)造成其在果實(shí)中的積累，導(dǎo)致殘留量超標(biāo)，進(jìn)而對人體健康產(chǎn)生潛在的危害，因此有必要檢測果蔬中的腈苯唑殘留量。

目前檢測腈苯唑的方法大都是儀器方法，儀器成本高，檢測時(shí)間長，操作復(fù)雜，不符合基層實(shí)驗(yàn)室的高效、便捷的檢測要求，因此，本發(fā)明制備出一種腈苯唑的單克隆抗體，應(yīng)用于膠體金試紙條、酶聯(lián)免疫試劑盒等快速檢測產(chǎn)品的制備，能夠適應(yīng)基層實(shí)驗(yàn)室的檢測需求，有利于提高監(jiān)管手段和監(jiān)督水平。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種腈苯唑單克隆抗體的制備方法，并將其應(yīng)用于腈苯唑殘留檢測試紙條和酶聯(lián)免疫試劑盒。

本發(fā)明所提供的腈苯唑單克隆抗體是以腈苯唑半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫原制備獲得，是由腈苯唑單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌獲得；所述羊抗鼠抗抗體是將鼠源抗體免疫羊得到；所述腈苯唑半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物是由腈苯唑半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

本發(fā)明所提供的檢測腈苯唑殘留的試紙條，包括樣品吸收墊(1)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3)、吸水墊(4)和底板(7)；所述反應(yīng)膜上具有包被有腈苯唑半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質(zhì)控線(6)，所述結(jié)合物釋放墊(2)噴涂有腈苯唑單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物。

所述樣品吸收墊(1)、結(jié)合物釋放墊(2)、反應(yīng)膜(3)、吸水墊(4)依次粘貼在底板(7)上，所述結(jié)合物釋放墊1/3～1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。

所述底板可為PVC底板或其他硬質(zhì)不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或?yàn)V油紙；所述結(jié)合物釋放墊可為玻璃棉或聚酯材料；所述吸水墊為吸水紙；所述反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

本發(fā)明所提供的檢測腈苯唑殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括：包被有包被原的酶標(biāo)板、腈苯唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液、腈苯唑抗體、酶結(jié)合物濃縮液、酶結(jié)合物稀釋液、底物顯色液、終止液、洗滌液，所述包被原為腈苯唑偶聯(lián)抗原，所述酶結(jié)合物為酶標(biāo)記的腈苯唑抗體。

所述腈苯唑特異性抗體是以腈苯唑偶聯(lián)抗原作為免疫原制備獲得，所述腈苯唑特異性抗體可為腈苯唑單克隆抗體或腈苯唑多克隆抗體，其中優(yōu)選腈苯唑單克隆抗體。

所述酶結(jié)合物的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶，其中優(yōu)選辣根過氧化物酶；酶結(jié)合物是由酶和腈苯唑抗體偶聯(lián)得到的。