[發(fā)明專(zhuān)利]一種鐮刀菌孢子的保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910973311.9
• 申請(qǐng)日: 2019-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110607237B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉易科;高春保;朱展望;鄒娟;舒軍;朱光;佟漢文;陳泠;張宇慶
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/04;C12R1/77
• 代理公司: 常州佰業(yè)騰飛專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 32231
• 代理人: 楊靜文

本發(fā)明提供一種鐮刀菌孢子的保存方法，涉及植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域，包括如下步驟：以鐮刀菌菌株為原材料進(jìn)行鐮刀菌孢子的培養(yǎng)，得到鐮刀菌菌液；對(duì)鐮刀菌菌液進(jìn)行過(guò)濾，對(duì)濾液進(jìn)行離心后，去除上清液，得到鐮刀菌孢子；將鐮刀菌孢子的濃度調(diào)至工作濃度，得到工作菌液；取工作體積的工作菌液裝至第二離心管內(nèi)，離心，去除上清液，得到孢子沉淀物；將第二離心管風(fēng)干，得到干燥的孢子沉淀物；將第二離心管密封，于?20℃條件下保存。本發(fā)明提供的鐮刀菌孢子的保存方法，保存的鐮刀菌孢子，一方面可以作到隨用隨取，另一方面使用過(guò)程中不需要重新計(jì)算加入的雙蒸水的體積，且制備的工作菌液中鐮刀菌孢子的濃度可控，快捷方便，省時(shí)省力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種鐮刀菌孢子的保存方法。

背景技術(shù)

鐮刀菌(Fusarium)廣泛存在于各種環(huán)境中，普遍存在于土壤及動(dòng)植物有機(jī)體內(nèi)，在地理分布上極為廣泛；鐮刀菌易侵染多種作物，尤其是糧食作物，例如，鐮刀菌的侵染可造成小麥赤霉病、小麥根腐病和玉米穗腐病的發(fā)生。同時(shí)，鐮刀菌在侵染過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生多種毒素，包括單端孢霉烯族化合物、煙曲霉菌毒素、玉米赤霉烯酮等，這些毒素通過(guò)飼料、食品等途徑進(jìn)入人類(lèi)食物鏈，給食品安全帶來(lái)很大隱患(Bai G H,Plattner R,Desjardins A,et al.Resistance to Fusarium head blight and deoxynivalenol accumulation inwheat[J].Plant Breeding,2001,120(1):1-6.)。

目前由鐮刀菌引起的小麥赤霉病在我國(guó)發(fā)病面積不斷擴(kuò)大，危害程度日益加重，培育和利用抗赤霉病小麥品種迫在眉睫，而對(duì)種質(zhì)資源或育成品種(系)進(jìn)行人工抗性鑒定則是培育和利用抗赤霉病品種的基礎(chǔ)。小麥赤霉病的人工接種鑒定在小麥揚(yáng)花期進(jìn)行，因不同小麥品種的揚(yáng)花期差異較大，因此小麥赤霉病抗性鑒定期間需要隨時(shí)提供一定量活力強(qiáng)的鐮刀菌孢子；目前在小麥赤霉病抗性鑒定期間，需要通過(guò)對(duì)鐮刀菌菌株進(jìn)行不間斷的活化和搖菌，隨時(shí)提供新鮮、活力強(qiáng)的孢子，這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，同時(shí)鐮刀菌于室內(nèi)連續(xù)多代移植培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致菌株的活力和致病性衰弱，而影響批次間和年度間鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

前人對(duì)鐮刀菌長(zhǎng)時(shí)間保持活力進(jìn)行了一些研究，段雙科等嘗試“一次制種，多年應(yīng)用”，將小麥赤霉病菌制備成小米粒菌體，置4℃冰箱環(huán)境中長(zhǎng)期保存，結(jié)果表明，小麥赤霉菌小米粒菌體在4℃冰箱環(huán)境中可長(zhǎng)期保存，7年之久仍有活力，且其田間致病性沒(méi)有發(fā)生衰退(段雙科,李寧,吳興元,楊英.小麥赤霉病菌種保存及致病性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2003(04):38-42.)；但這種方法制備小米粒菌體過(guò)程較為繁瑣，而且在后期接種過(guò)程中雖然不需要重新活化，但接種量不易控制(作者描述為一個(gè)小米粒菌體的接種量，一是接種體積不易控制，米粒及附著基質(zhì)有大有小，二是相同體積米粒帶菌量的一致性不易控制)。

徐素珍等利用麥穗和麥粒作為保存基質(zhì)，4℃下可保存13年，菌株的每代菌絲體和分生孢子存活率為100％，培養(yǎng)性狀及產(chǎn)孢能力正常(徐素珍,陸仕華,周世明,陸金萍,魏春妹.致病產(chǎn)毒禾谷鐮刀菌株的保存方法[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),1992(02):55-59)，但這種方法需要重新活化，需要較長(zhǎng)時(shí)間才能得到合適濃度和有活力的菌液。

因此，需建立一種更為簡(jiǎn)便的保持鐮刀菌活力的方法，該方法的確立可為抗赤霉病種質(zhì)資源的篩選和抗赤霉病小麥新品種的培育等研究提供方法基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明解決的問(wèn)題是目前保存的鐮刀菌在使用時(shí)需要重新活化，費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)。

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種鐮刀菌孢子的保存方法，包括如下步驟：

S1：以鐮刀菌菌株為原材料，以綠豆湯為培養(yǎng)基，進(jìn)行鐮刀菌孢子的培養(yǎng)，得到鐮刀菌菌液；

S2：對(duì)所述鐮刀菌菌液進(jìn)行過(guò)濾，將濾液進(jìn)行離心后，去除上清液，得到所述鐮刀菌孢子；

S3：利用雙蒸水，通過(guò)血球計(jì)數(shù)板將所述鐮刀菌孢子的濃度調(diào)至工作濃度，得到工作菌液；