[發(fā)明專(zhuān)利]裂葉獨(dú)活醇提取液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910971194.2
• 申請(qǐng)日: 2019-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110455964B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嚴(yán)志宏;鄧敏芝;蔡瑛;袁恩;周立分;頓珠次仁;劉苗苗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 45119 南寧新途專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 但玉梅

本發(fā)明提供裂葉獨(dú)活醇提取液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法，屬于化學(xué)成分分析技術(shù)領(lǐng)域。步驟為S1：采用乙醇加熱超聲提取的方法提取裂葉獨(dú)活藥材中的有效成分，制得裂葉獨(dú)活供試品溶液；稱(chēng)取香豆素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品，配制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液；S2：將供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液采用超高效液相色譜?四極桿?飛行時(shí)間質(zhì)譜方法進(jìn)行檢測(cè)；S3：采用PeakView1.2軟件對(duì)質(zhì)譜的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)快速篩查和二級(jí)質(zhì)譜分析，從裂葉獨(dú)活醇提取液快速鑒定多種香豆素類(lèi)成分。本發(fā)明從裂葉獨(dú)活中共分離和鑒定出32個(gè)香豆素類(lèi)化合物，實(shí)現(xiàn)了裂葉獨(dú)活香豆素較為全面和系統(tǒng)的分析，為香豆素類(lèi)成分定性分析和裂葉獨(dú)活藥理研究提供基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學(xué)成分分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及裂葉獨(dú)活醇提取液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法。

背景技術(shù)

香豆素是廣泛分布于植物界中的次生代謝物質(zhì),常與生源密切的桂皮酸、黃酮類(lèi)、木脂素等伴生,廣泛分布于高等植物中,尤其是傘形科、蕓香科、菊科、豆科、蘭科、茄科、瑞香科、虎耳草科和木樨科等植物及微生物代謝產(chǎn)物中。香豆素具有調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)、抗菌抗病毒、抗凝血、松弛平滑肌、吸收紫外線和抗輻射等多種生物活性。至今已從蕓香科柑桔屬植物中分離出多種香豆素類(lèi)化合物。傘形科獨(dú)活屬植物裂葉獨(dú)活Heracleum millefoliumDiels，藏藥名為巴木保，又有別名千葉獨(dú)活、藏當(dāng)歸，主要分布于我國(guó)西藏、青海、甘肅、四川、云南，是一種常用藏藥。裂葉獨(dú)活性味辛、苦，微溫，用于治療風(fēng)寒濕痹、腰膝疼痛、少陰伏風(fēng)頭痛、腰膝疼痛，頭痛齒痛等癥。其中，裂葉獨(dú)活中主要的活性成分為香豆素，因此，建立一種高效快速的提取、分離純化和鑒定裂葉獨(dú)活中香豆素的方法對(duì)于深化裂葉獨(dú)活的藥理作用研究及完善質(zhì)量控制體系均具有重要的意義。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)獨(dú)活的研究比較多，對(duì)裂葉獨(dú)活的研究相對(duì)較少。饒高雄等通過(guò)柱層析和紅外分光光度法從裂葉獨(dú)活乙醇提取物中分離鑒定出11個(gè)化合物，僅鑒定出6種香豆素類(lèi)化學(xué)成分，目前尚缺乏對(duì)裂葉獨(dú)活中香豆素類(lèi)化學(xué)成分的系統(tǒng)研究和藥理作用研究。超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用( UHPLC-Q-TOF/MS) 技術(shù)具有高分辨、高靈敏的定性分析能力和強(qiáng)大的結(jié)構(gòu)表征能力，已廣泛運(yùn)用到中藥化學(xué)成分分析快速分離和鑒定中。但目前對(duì)裂葉獨(dú)活醇提液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法里，還沒(méi)有應(yīng)用該技術(shù)的相關(guān)報(bào)道，如何設(shè)定色譜和質(zhì)譜的條件，同時(shí)高效分離多種香豆素類(lèi)成分，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，是目前亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種裂葉獨(dú)活醇提取液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法，從裂葉獨(dú)活中共分離和鑒定出32個(gè)香豆素類(lèi)化合物，實(shí)現(xiàn)了裂葉獨(dú)活香豆素較為全面和系統(tǒng)的分析，為香豆素類(lèi)成分定性分析和裂葉獨(dú)活藥理研究提供基礎(chǔ)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

裂葉獨(dú)活醇提取液中香豆素類(lèi)成分的分析和鑒定方法，包括以下步驟：

S1：采用乙醇加熱超聲提取的方法提取裂葉獨(dú)活藥材中的有效成分，制得裂葉獨(dú)活供試品溶液；稱(chēng)取香豆素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品，配制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

S2：將供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜方法進(jìn)行檢測(cè)；

S3：采用PeakView1.2軟件對(duì)質(zhì)譜的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)快速篩查和二級(jí)質(zhì)譜分析，從裂葉獨(dú)活醇提取液快速鑒定多種香豆素類(lèi)成分。

本發(fā)明中，優(yōu)選地，所述步驟S1中的具體做法為：

S1.1供試品貯備液的制備：將裂葉獨(dú)活藥材粉碎過(guò)80-120目篩，精密稱(chēng)取5g，按照固液比為1:10-12用體積濃度為70%的乙醇溶液浸泡20min-60min，然后加熱至45-50℃，利用超聲提取1-2h，隨后過(guò)濾取濾液；將濾渣重復(fù)上述操作，合并2次濾液，濃縮至無(wú)醇味，得浸膏；將浸膏用體積濃度為50%甲醇溶液定容至25mL，得供試品貯備液，4℃貯存?zhèn)溆茫?/p>