[發明專利]裂葉獨活醇提取液中香豆素類成分的分析和鑒定方法

有效

• 申請號: 201910971194.2
• 申請日: 2019-10-14
• 公開（公告）號: CN110455964B
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發明（設計）人: 嚴志宏;鄧敏芝;蔡瑛;袁恩;周立分;頓珠次仁;劉苗苗
• 申請（專利權）人: 江西中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 45119 南寧新途專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 但玉梅

1.裂葉獨活醇提取液中香豆素類成分的分析和鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：采用乙醇加熱超聲提取的方法提取裂葉獨活藥材中的有效成分，制得裂葉獨活供試品溶液；稱取香豆素類標準品，配制成標準品溶液；

S2：將供試品溶液和標準品溶液采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質譜方法進行檢測；測定條件如下：

色譜條件：色譜柱規格為2.1×100mm，1.7μm；柱溫40℃，進樣量4μL，流速0.25mL/min；以0.1%甲酸水溶液為流動相A，以乙腈為流動相B進行梯度洗脫，洗脫的程序為：0～10min，5%～15%B；10～20min，15%～25%B；20～30min，25%～45%B；30～32min，45%～47%B；32～35min，47%B；35～40min，47%～50%B；40～45min，50%～55%B；45～50min，55%～95%B ；50～52min，95%B；52～52.1min，95%～5%B； 52.1～55min，5%B；

質譜條件：采用ESI電噴霧離子源，正離子模式檢測；質量掃描范圍m/z100～1000，噴霧電壓5.5kV，離子源溫度500℃，去簇電壓100 V，碰撞能量45eV，碰撞能量疊加15eV，氣簾氣壓力40psi，霧化氣和輔助氣壓力均為50psi，數據采集時間55min，采用 TOF-MS-IDA-MS/MS方式采集數據，IDA設置響應值超過100cps的6個最高峰進行二級質譜掃描，子離子掃描范圍m/z：50～1000，滿足該條件的優先進行二級掃描，開啟動態背景扣除；

獲得化合物的總離子流圖、一級質譜信息和二級質譜信息；

S3：采用PeakView1.2軟件對質譜的數據進行分析，通過數據庫快速篩查和二級質譜分析，從裂葉獨活醇提取液快速鑒定多種香豆素類成分。

2.根據權利要求1所述的裂葉獨活醇提取液中香豆素類成分的分析和鑒定方法，其特征在于，所述步驟S1中的具體做法為：

S1.1供試品貯備液的制備：將裂葉獨活藥材粉碎過80-120目篩，精密稱取5g，按照固液比為1:10-12用體積濃度為70%的乙醇溶液浸泡20min-60min，然后加熱至45-50℃，利用超聲提取1-2h，隨后過濾取濾液；將濾渣重復上述操作，合并2次濾液，濃縮至無醇味，得浸膏；將浸膏用體積濃度為50%甲醇溶液定容至25mL，得供試品貯備液，4℃貯存備用；

S1.2標準品貯備液的制備：精密稱取補骨脂素、東莨菪內酯、佛手柑內酯、歐前胡素、蛇床子素、氧化前胡素、二氫歐山芹醇當歸酸酯七種標準品各1mg，分別加入5mL體積濃度為50%的甲醇溶解，制得質量濃度為200μg/mL標準品貯備液，4℃貯存備用；

S1.3供試品溶液和標準品溶液的準備：取上述供試品貯備液和標準品貯備液各1mL，分別轉移至2mL離心管內，放入低溫高速離心機以13000r·min^-1離心8-15min，離心后分別取0.5mL上清液于1.5mL的進樣瓶內，即得裂葉獨活供試品溶液和標準品溶液。

3.根據權利要求1所述的裂葉獨活醇提取液中香豆素類成分的分析和鑒定方法，其特征在于，所述步驟S3中，通過數據庫快速篩查和二級質譜分析，從裂葉獨活醇提取液快速鑒定多種香豆素類成分的具體方法為：采用PeakView1.2軟件對質譜的數據進行分析；根據國內外專業數據庫Pubmed，ChemSpider，Metlin，中科院化學專業數據庫及國內外裂葉獨活及香豆素相關研究文獻，收集香豆素類化合物名稱、分子式及二級碎片信息，初步建立裂葉獨活香豆素類化學成分數據庫，結合軟件XIC Manager功能，初步篩選出質量偏差小于5×10^-6的香豆素成分，然后將篩選出的成分進一步與對照品和文獻中二級碎片比較，從裂葉獨活醇提物中共鑒定和推測出多種香豆素類化合物。