[發(fā)明專(zhuān)利]一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910965551.4
• 申請(qǐng)日: 2019-10-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110819711A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊建凱;孫國(guó)柱;扈玉華;焦保華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其具體方法如下：(1)臨床獲取患者的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)用于提取其內(nèi)外泌體；(2)將分散均勻的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)分離提取腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體，用紫外分光光度計(jì)對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞來(lái)源外泌體進(jìn)行定量；(4)將上述步驟中分離提取的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體采用熒光定量PCR方法測(cè)量FAM83H?AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。本發(fā)明通過(guò)外部培育從患者身體中獲取的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并對(duì)培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行外泌體分離和長(zhǎng)鏈RNA含量的檢測(cè)，即通過(guò)測(cè)定外泌體分泌量，以及相應(yīng)的FAM83H?AS1、XIST等含量作為診斷預(yù)后重要的判斷之一。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種診斷預(yù)后的方法，具體是一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法。

背景技術(shù)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)常見(jiàn)的腫瘤，發(fā)病率約為3-5/10萬(wàn)人。組織學(xué)分四級(jí)：I級(jí)、II級(jí)呈低惡性度，具有良性生物學(xué)特性；III級(jí)和IV級(jí)為高級(jí)別膠質(zhì)瘤，特別是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，其中位生存期僅為12-18個(gè)月，間變膠質(zhì)瘤(WHO III級(jí))的中位生存期為2-5年，低級(jí)別膠質(zhì)瘤(WHO I、II級(jí))的中位生存期也僅為4-10年。

雖然目前神經(jīng)外科手術(shù)技巧在不斷進(jìn)步，手術(shù)儀器越來(lái)越先進(jìn)，結(jié)合放、化療也取得了新的進(jìn)展，另外還有一些新的治療方法，如免疫治療、以EGFR、IGFR、PDGFR等為靶點(diǎn)的靶向治療和抗血管生成的治療方法，這些方法通常根據(jù)患者的實(shí)際情況進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用。但膠質(zhì)瘤的5年生存率并沒(méi)有得到明顯提高，其主要原因是腦膠質(zhì)瘤的高復(fù)發(fā)性和異質(zhì)性以及腦膠質(zhì)瘤患者在化療過(guò)程中出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這嚴(yán)重的影響了腦膠質(zhì)瘤的治療效果。

而目前已知細(xì)胞間通過(guò)外泌體實(shí)現(xiàn)通訊，同時(shí)包含長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)；其中促癌lncRNA現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)：與正常腦組織相比，多種lncRNA在膠質(zhì)瘤表達(dá)上升，促進(jìn)膠質(zhì)瘤的形成、增殖、遷移、侵襲，發(fā)揮促癌的作用，使膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后變差，如FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其具體方法如下：

(1)臨床獲取患者的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)用于提取其內(nèi)外泌體，將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用細(xì)胞分散劑分散，并且采用振蕩設(shè)備將細(xì)胞分散均一，然后采用平板法測(cè)定細(xì)胞含量；

(2)將分散均勻的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，并供應(yīng)新鮮的空氣；

(3)分離提取腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體，用紫外分光光度計(jì)對(duì)患者的腫瘤細(xì)胞來(lái)源外泌體進(jìn)行定量；

(4)將上述步驟中分離提的取腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體采用熒光定量PCR方法測(cè)量FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟(1)中細(xì)胞分散劑的原料包括離子螯合劑、膠原酶和胰蛋白酶。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述離子螯合劑濃度為0.02-0.04％、膠原酶濃度為0.1-0.3％和胰蛋白酶濃度為0.2-0.4％。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟(2)中，向培養(yǎng)基按重量百分?jǐn)?shù)計(jì)加入以下組份的混合物：脂聯(lián)素5-15％、TGF-β1 30-50％、IGF-1 10-30％、LIF 20-40％。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述步驟(2)中的培養(yǎng)時(shí)間80-100個(gè)小時(shí)，培養(yǎng)條件為37℃，5％CO₂濕潤(rùn)培養(yǎng)。